中华大蟾蜍ZW型性别决定的细胞遗传学证据.pdfVIP

遗 传 学 报， 10归);298-305,1983 ActaCeneticaSinica 中华大蟾蛛zw型性别决定的细胞遗传学证据’‘ 尚克刚 邓崇新 北（京大学生物系） （锦州医学院） 中华大蟾赊的性染色体可能是第10对染色体，其类型为 zwa 第10对染色体上的一个 特定的区域被认为是与性别分化有关的，它们是晚复制的，并相当于C带区域。在复制的晚 期阶段，雄性个体的两个特定区域是同步复制的，而雌性个体却是不同步复制的。 中华大蟾蛤 (Bufobufogargarizans）的染色体核型国内已有报道t},za，Schmid(1978) 也曾报道了美洲大蟾赊 (Bufobufoamerican)的核型 【。，‘，然而，无论是常规染色还是C带 或银染都没有发现异态的染色体对，也没有发现任何与性别分化有关的区域。但是早在 1942年 Ponse应用雌雄同体的遗传学分析就已指出 Bufobuf。是 ZW 型 〕〔‘。 1981年 Engel和 Schmid使用 H-Y抗原的鉴别方法，更明确和使人信服地提供了该动物是 ZW 型的根Schempp和Schmid，以骨髓细胞为材料，使用BrdUrd-Hoechst-Giemsa 技术研究了食用蛙 (Ranaesculanta)的染色体复制顺序，并首次发现了食用蛙的性染色 体是第4染色体，并为 XY型的性别决定提供了细胞遗传学的根据。 本文使用了改良的技术，以体外培养的淋巴细胞为材料研究了中华大蟾蛛的复制顺 序，并将提出根据，指出第 10对染色体是性染色体以及 ZW 型性别决定的细胞遗传学 依据。 材 料 与 方 法 实验动物于1982年3月至4月期间选购于北京市海淀区实验动物供应站。前后共 获得18只个体 （Yd各9只）的染色休标本进行观察。具体方法如下： (1)两栖类常规外周血培养21〔(250C,5天），在细胞制片前15-19小时加入 BrdUrd 最（终浓度 10微克／毫升）和秋水仙素 最（终浓度2微克／毫升）。常规空气干燥法制片。 (2）为了获得染色体复制过程的图形，本文作者改良了Schempp和Schmid的技术C9} 使之适用于外周血培养，并吸取了吴昊和王秀珍[31［的黑光灯技术和参考了 Cawood的方 法，［，。制片经3天老化，于室温下将制片依次浸人 0.14MNaCl,0.004MKCl和 。.Olm PBS(PH7.0）中各，分钟，然后以Hoechst33258处理15-20分钟 （1微克／毫升，PBS 配制）。制片经 PBS浸泡10分钟并经蒸馏水冲洗后置于50--60℃的2xSSC溶液中， 同时在距离制片 7cm处以20瓦 x2的黑光灯照射，处理30分钟。制片经水洗后空气 干燥。7份 PBS(pH6.8)3份 Giemsa原液染色。 (3)C带，采用常规的Ba(OH)：技术112［1，饱和 Ba(OH)2的处理时间为10-15秒 5（5℃）。 本文于1982年8月12日收到。 1)本文是在李汝祺教授与昊鹤龄副教授的指导下进行的，并经李汝祺教授斧正。郑玉兰同志和北京市肿瘤所徐 新来等同志给予多方面的帮助，谨此一并致谢。 4期 尚克刚等：中华大蟾赊 Z,W 型性别决定的细胞遗传学证据 299 结 果 一（）三个时期的划分 采用上述方法，只要培养是成功的，每只个体都可获得丰富的分裂相和由于染色体上 各区域的非同步复制而产生的带型。由于使用的是非同步化的细胞，因此 BrdUrd渗人 细胞的时期是不同的。当细胞处于S期时，已经完成 DNA合成的染色体片段是深染的 紫（红色），而在 BrdUrd存在的情况下继续合成的那些区域或片段，由于 BrdUrd的渗人 而成为浅染的 淡（蓝色）。根据1096个细胞的观察，我们按照在中期染色体上着色深浅比 例的不同，将核型区分为三个类型： (1)BrdUrd处理时细胞处于复制的早期阶段 简（称为早“复制阶段”），特征为早复制 的深染带和晚复制的浅染带之间，在面积的比例上大致各占一半 （图版I中A和B的第1 纵列）。 (2)BrdUrd处理时细胞处于复制的中期