展青霉和产黄青霉种间体细胞杂交II.病毒通过原生质体融合的传递.pdfVIP

遗 传 学报，11(3);159 ActaGeneticaSinica 展青霉和产黄青霉种间体细胞杂交 11．病毒通过原生质体融合的传递 ）‘ 陈开英 梁平彦 （中国科学院微生物研究所，北京） 具有直径40毫微米球形病毒 (Pcv）的产黄青霉和有杆状病毒 P（pvl)及26-29毫微米 球形病毒 (Ppv2）的展青霉通过原生质体融合杂交，获得杂种及分离子。电镜、血清反应、凝胶 电泳检验病毒表明：1()病毒的传递受到寄主基因组的影响，在杂种及分离子中Pcv的大量出 现总是伴随着产黄青霉整套基因组的存在。(2)感染同一寄主时不同的真菌病毒间存在着类 似植物病毒的交互保护作用。 本文是 dsRNA真菌病毒通过真菌种间融合转移的首次报告。 杂种及部分单倍体重组子具有抗葡萄球菌Staphylococctss。“。。和抗链格抱Altcrnariasp．的 能力。 在人工条件下，真菌病毒不能以常规的汁液摩擦或混合接种的方法侵染菌体，这是真 菌病毒不同于其它病毒的重要方面，也是真菌病毒的许多基本研究难于开展的原因。迄 今为止，病毒之间关系的研究只限于从血清上的相关性以区别外壳蛋白是否存在相同的 抗原决定簇，并未能相互接种以了解其侵染性12〔1。常用菌丝联合传播病毒的方法受到细 胞间不可亲合性的限制，”〔，而在自然条件下细胞间的不可亲合性和缺乏自然传毒媒介正 是限制病毒传播的因素。 以往作者采用原生质体融合技术将产黄青霉病毒转移到天然无病毒的菌丝中11〔，及 展青霉和产黄青霉种间杂交获得二倍体。非整倍体杂种重组体的成功启示了应用融合技 术进行不同病毒的传递，借以研究病毒的寄主范围、病毒和寄主以及病毒之间的相互关 系。 材 料 和 方 法 一（）菌种来源和特征 产黄青霉菌株3，粉红抱子，需黄M,吟，生长快，是青霉素 产生菌6205经过紫外光诱变获得的突变体。6205菌株携带球形40nm病毒31〔。展青霉 菌株2和3，白色抱子，生长慢，需亮氨酸或蛋氨酸，是灰黄霉素产生菌D756经亚硝基狐诱 变的后代，感染病毒情况以往无报道。 二（）培养基及培养条件 见前报[1［}31。原生质体融合采用基本培养基 M（M）和完 全培养基 (CM)，配方见前报21〔。以上培养一般在25-26℃下进行。 本文于 1983年3月11日收到。 I)产黄青霉菌种由华北制药厂抗菌素研究所供给，展青霉菌种DrS6由上海新华制药厂供给，直接亲本由本组刘 宏迪同志供给，深表感谢。 160 遗 传 学 报 II卷 三（）病毒及核酸提取方法 同前[1［,310 （四）病毒及病毒核酸检验方法 1.2务聚丙烯酸胺琼脂糖垂直平板电泳 含0.75多双丙烯酸胺和0.3务琼脂糖， 缓冲液为40mMTris-20mM乙酸盐一2rn11JEDTA钠盐，30niA电流，电泳6小时，7多醋 酸固定后0.5%氨基黑染色。 2．免疫双扩散 采用产黄青霉6205的病毒制备兔的抗血清检验病毒；聚肌昔酸： 聚胞苔酸和甲基化牛血清蛋白制备的兔抗血清，检验真菌病毒双链核糖核酸，其特异性血 清反应见文献 斗［，17]o 3．电镜观察 采用Formvar膜，2多磷钨酸钠负染，日立H500电镜观察。 五（）原生质体的分离、融合处理和融合剂的配置 均与前文相同刘‘。 六（）杂种的获得及分离子的诱发 与前文相同2，〔。 七（）抱子体积和菌落直径测定方法 同前文5]‘O 八（）青霉素效价测定 待测菌株用母瓶培养基及发酵培养基，260C摇瓶培养11 天，离心收获发酵液。 用磷酸缓冲液作系列稀释。 测定标准菌种为金黄色葡萄球菌 (Staphylococcusaureus209p)，系本所抗生素组供给。 九（）灰黄霉素测定 培养基及培养方法与 八（）相同，直接测定发酵液及菌丝抽提 液对抱子萌发和芽管生长卷曲程度的作用。标准菌种是链格抱 (4lternaria