爪哇稻(Java14)原生质体培养与植株再生.pdfVIP

遗传 HEREDITAS(Beijing)17(4):21-241995 爪哇稻(J（ava14)原生质体培养与植株再生 朱根发 余毓君 华（中农业大学农学系，武汉 430070) 摘要 在NBL中建立初始悬浮培养物，再转移到AA：中建立原生质体分离用的胚性细胞悬浮系，利用 这个方法成功地建立了Java14、毫梅、D.V.85,02428等的胚性细胞悬浮系．从Java14中分离的原生 质体在KPR培养基中获得大量再生细胞团，并成功地实现了植株再生．通过渗透压的调整和培养过程中 的加液处理，获得了0.8％较高的植板率． 关键词 爪哇稻，胚性细胞悬浮系，原生质体，植株再生 ProtoplastCultureandPlantRegenerationofjavanicaRice(Java14) ZhuGenfa YuYujun (DepartmentofAgronomy,HuazhongAgriculturalUniversity,Wuhan430070) AbstractEmbryogeniccellsuspensionsofJavai4,Haomei,D.V.85,02428etc.wereestablishedviasus- pensionmethodsoffirstestablishingprimarysuspensionculturesonNBL andthen establishing embryogenccellsuspensionforprotoplastisolationonAA2medium.Alargenumberofcloneswereob- tainedwhenprotoplastsofJavai4wereculturedonKPRmediumandplantietswereregeneratedBorn clones.Platingefficiencywasupto0.8%byadjustingosmolalityandlowingosmolalityinprotoplastcul- ture. Keywords javanicarice,Embryogeniccellsuspensions,Protoplast,Plantregeneration AA培养基对水稻原生质体悬浮细胞具有促进分散、减少NH才-N对悬浮细胞毒害作用的优点，但悬浮细胞 增殖速度较慢．Li等8)（认为，在通用的AA,R2,RY,MS5种培养基中，AA中的悬浮细胞生长最慢，建立质 浓而分散的悬浮细胞系需要较长时间，这对原生质体的培养不利．水稻原生质体培养研究已有很大进展，但爪哇稻 原生质体成株尚未有报道．本试验利用数个基因型，对3种培养基A（A,NBL,MBL)进行悬浮培养研究，并用胚 性细胞系分离原生质培养和再生成株． I材 ‘料 与 方 法 1.1胚性细胞悬浮系的建立和原生质体分离 本文方法与光‘敏核不育水稻(31301s）原生质体培养再生成株，一文③相同． 1.2原生质体培养 将纯化的原生质体以0.5-1xI护的密度培养在KPR培养基中，原生质体用0.6％琼脂糖包埋．25土2℃暗培 养，培养第2天起在倒置显微镜下观察分裂情况，进行渗透压调整试验．培养2-3天后加人。.1-0.2ml的液体 KPR培养基，根据细胞团大小及细胞分裂情况加人逐步降低渗透压和提高2,4-D浓度的KPR.30天后在解剖镜 下计数肉眼可见细胞团数，统计植板率．再转人不同分化培养基中． 1.3原生质体再生细胞团的分化 22 遗 传 HEREDITAS(Beijing)1995 17卷 将含有再生细胞团的琼脂糖切成大小一致的小块，分别接种到分化培养基D（。或Do+NAA0.5mg/L+KT 4mg/L)中，暗条件下分化 1周后光下分化，20天后统计分化率． 1.4培养基配方表（1) 表 1本试验培养基配方m（g／L) 成 分 AA NBL MBL KPR Do 大量元素 见文献 9〔,8)