山葡萄成熟果皮cDNA文库的构建及ESTs初步分析.pdfVIP

1232 植物生理学通讯 第46卷第 12期，2010年 l2月 山葡萄成熟果皮cDNA文库的构建及ESTs初步分析 李凤 ，杨成君 ，李波-，王军 ，z，，刘海峰 东北林业大学林学院，哈尔滨 150040；中国农业大学食品科学与营养工程学院葡萄与葡萄酒研究中心，北京100083；延 边大学农学院，吉林龙井 133400 提要：以山葡萄成熟果皮为材料，采用CreatorMTSMARTMTcDNALibraryConstruction技术构建了cDNA文库。经鉴定，文 库的库容量为 1．001~10，重组率为94．11％，插入片段在0．25—1．9kb。经随机测序，获得935个有效ESTs，聚类拼接后得到 636条单基因簇(unigenes)，包括107个重叠群(contigs)~529个单拷贝(singlets)。这些数据为今后山葡萄功能基因分离克隆 和功能基 因组学研究奠定了基础。 关键词：山葡萄；cDNA文库；表达序列标签 cDNALibraryConstructionofⅥ amurensisBerrySkiasandPrimaryAnalysis ofExpressedSequenceTags(ESTs) LIFeng，YANG ChengJun，LIBo。WANG Jun ’’，LIU Hai—Feng CollegeofForestry,NortheastForestryUniversity,Harbin15004~China；CenterforViticultureandEnology,CollegeofFood Science＆NutritionalEngineering,ChinaAgriculturalUniversity,Beijing100083,China；SchoolofAgriculturaLYanbianUniversity, Long]ing,JiZin13340~Ch a Abstract：AcDNAlibraryrfomtheamurgrape(VitisamurensisRupr．)wasconstructedbyusingCreatorⅢ SMARTMcDNALibraryConstructionprotoco1．Thelibrarycapacitywas1．001x100witharecombinantrateof 94．11％andtheinsertedcDNArfagmentsrangedrfom 0．25to1．9kb．935availableESTsthroughrandom sequencingwereobtained．and636unigeneswhichincluding98contigsand201singletsweregeneratedafter clustering．Th isstudyispropitioustogenecloningandfunctionalgenomicresearchofamurgrape． Keywords：amurgrape(Vitisamurensis)；cDNAlibrary；expressedsequencetag(EST) 中国是世界上大面积人工栽培 山葡萄的唯一 途径，在基因操作中具有十分广泛的基础性作用(孟 国家。山葡萄是中国东北蕴藏量大，经济价值高的 玉平等2009)。由于cDNA是 由mRNA反转录而来 耐寒野生果树资源(董万超等2002)，是葡萄属中最 的，因此它包含特定的组织材料在特定时期基因表 抗寒的一个种。枝蔓可耐一40℃低温，根系可耐 达的信息，排除了基因组文库中内含子序列对筛选 一 14～一16℃低温(宋润刚等2009)。山葡萄也是东 相关性状基因的影响，是获取未知功能基因、克 北酿造葡萄酒的主要原料，山葡萄浆果酿造的红葡 隆新型细胞因子、分离新的组织特异基因的一种 萄酒畅销国内外，是我国寒带地区果树的优势产 有效手段(杨成君和王军2007)。对非模式物种，通 业。果实中的糖 、酸、色素是构成山葡萄酒香 过cDNA文库筛选 目的基因更具明显优势(李冬花 气、口味和成色的物质，其含量的高低直接影响 等2009)。本研究通过构建 山葡萄成熟果皮的 到成品酒的质量和风味(秦磊等2008)。因此研究