囊泡中水溶性探针的共振光散射研究.pdfVIP

第28卷，第lo期 光谱学与光谱分析 2oo and 0ctober。2008 8年1O月 !；pectroscopySpectralAnalysis 囊泡中水溶性探针的共振光散射研究 于 菲，熊家悦，李 娜’，刘 锋，李克安 北京大学化学与分子工程学院，北京l00871 摘要 以Tween40胆固醇非离子表面活性剂囊泡作为模拟细胞屏障，联吡啶钌作为水相探针，利用共振 光散射方法在不需分离游离探针的情况下表征了包封于囊泡内的水相探针，并用强度比实现了对浓度的线 性响应。该膜屏障模型可用于研究药物透膜能力，为研究药物在体内的作用效果提供了方法学上的支持。 关键词囊泡；共振光散射；联吡啶钌 中图分类号：0433文献标识码：A 文章编号：1000-0593(2008)10—0505一02 药物在体内的吸收过程中需要穿过一系列膜屏障[1]。例 当样品中不含荧光探针，或荧光探针处于囊泡外时，共振光 如口服药物需要经过肠道吸收，进入血液后需要扩散进入细 ·散射信号较低，而当Ru(bpy)矿包封于囊泡中时，其共振光 胞膜才能在细胞内起到抗氧化作用。因此，评价药物对细胞 散射信号较空白囊泡的检测结果有很大增强，在350和520 屏障的透过能力对药效评价是十分重要的。体外实验方法只 能评价抗氧化药物在实验室环境下的效果[2]，体内方法又需 在囊泡中时，Ru(bpy)矿更容易形成聚集态，从而产生共振 要大量临床实验，耗费较长的时间和大量经费。本工作希望 光散射现象。 通过建立模拟细胞屏障，在实验室条件下模拟药物在体内吸 收的过程，检测药物透过细胞膜的能力，使药效的评价更接 近体内真实环境。 由Tween 40和胆固醇(Cholesterol，CH()L)构成的非离 子表面活性剂囊泡是由双层膜构成的封闭球状或椭球状结 构，其形态和性质与磷脂双层构成的细胞膜相似，稳定性更 好，制备方便[3“]。透射电子显微镜照片可看到囊泡由表面 活性剂和胆固醇组成的膜骨架。经均匀化处理后，囊泡尺寸 均匀。 O 61)0 700 300 伽5(10 将Ru(bpy)2+荧光探针包裹进囊泡后，其荧光信号与游 ‘ Wal，elen或h／nm 离状态没有明显差别。Ru(bpy)i+是一种亲水性荧光探针， RLS Mankv幅ickaI．d №1 si霉词咖I V鹤icle明凹psul砒i呜 因此分布于囊泡内的水相中，但其结构中具有疏水基团，与 Ru(bpy)扩(触p陆mt删) 膜内壁有相互作用，并且对膜有一定穿透能力，所以易受浓 度梯度的驱动而泄漏。采用共振光散射(ResonaIlcelight- 形成囊泡的Tween40与CHOI。摩尔比对共振光散射的 scattering，RLS)的方法[5]可以不经分离检测囊泡内的探针。 强度会产生一定影响。当CHoL比例增加时，空白囊泡和含 共振光散射是指当发光团发生聚集时，散射光在吸收带附近 Ru(bpy)；十囊泡的共振光散射信号强度均有所增加(图2)。 会有一增强，且不受介质影响，因此可作为发光团聚集的判 然而，CHoL比例的提高也造成囊泡体系的浊度增加，使得 据。信号的强度与相近发光团之间的耦合作用强弱、聚集体 作为背景的空白囊泡产生较强的共振光散射信号，降低了对