PEP-1-SOD1联合银杏叶提取物预处理对急性期脑梗死保护作用.pdfVIP

摘 要 11 ide，CPP)PEP一1 目的研究细胞穿透肽(cepenetratingpept di smutase，SODI) 介导铜，锌一超氧化物歧化酶(Cu，Zn-superoxide 在小鼠大脑皮质的跨膜转导能力以及转导的时间关系；研究单独应用 nko PEP一1-SODl融合蛋白预处理以及联合应用银杏叶提取物(Gi Bi Ext lobaract，GBE)预处理时对小鼠脑梗死后神经元的保护作用； 探讨其对神经元凋亡的影响以及可能存在的保护机制。 方法(1)取体质量35～409的雄性昆明小鼠随机分成两组(n=75)： SODl组以及PEP-I-SODl组。每组小鼠分别腹腔注射200ug的SODl h、2h、4h、8 蛋白和PEP-I-SODl融合蛋白，在1 h以及24h时 间点取脑组织行相关指标检测：Westernblot测定外源性SODl表达， 免疫荧光化学法测定SODl定位以及分布，黄嘌呤氧化酶法测定SODl middle 以及联合组(n=15)，建立永久性大脑中动脉闭塞(permanent cerebralOCClus artery ion，PMCAO)模型。手术前30min，假手 00 术组及模型组腹腔注射生理盐水2 PEP-I-SODl融合蛋白200 mg／kg， ug，GBE组注射舒血宁注射液35 联合组注射PEP-I-SODl融合蛋白200ug以及舒血宁注射液35mg／kg。 24h后取小鼠脑组织进行相关指标检测：①TTC染色测定梗死体积； ②黄嘌呤氧化酶法测定SODl活性，TBA法测定丙二醛 dUTPNick—EndLabel dUTP缺口末端标记(TdT-mediated ing，TUNEL) 测定细胞凋亡；④免疫荧光化学法测定凋亡相关基因bax和bcl-2表 达。 Western blot结果显示药后1h，PEP-I-SODl组小鼠大脑皮质在分 子量约26KD处出现目的蛋白表达条带，4h达高峰，24h仍有蛋白表 2 达；而SODl组的小鼠脑组织未能检测到目的蛋白表达；②免疫荧光 化学结果显示PEP-I-SODl组小鼠大脑皮质给药后1h出现特异性绿 色荧光，4h时荧光最强，24h仍可见绿色荧光；而SODl组小鼠大 脑皮质任何时间点均未发现绿色荧光；③SODl活性检测结果提示 h PEP-I-SODl组小鼠大脑皮质给药后1SODl活性升高，4h达高峰， 24 导进入小鼠大脑皮质，且转导入脑组织的SODl具有酶的活性；而单 独的SODl则不能进入中枢神经系统。(2)在对脑梗死后神经元的 O．05 vs模型 VS模型组)，联合组梗死体积则明显缩小(PO．01 h模型组SODl活性明 SODl活性以及MDA含量检测显示脑梗死后24 显下降，MDA含量升高(Po．01 联合组SODl活性升高，MDA含量下降(Po．01VS模型组)，但此