蒙古绵羊雌性生殖道β-防御素(sBD-1)表达的研究.pdfVIP

蒙古绵羊雌性生殖道§一防御素(sBD-1)表运的研究枣 营贵方唐博李淑风王秀梅 (蠹蒙古农壁大学动物稃鸯捱学学院呼和浩特010018) 内源性抗微生物欺是生物体内先天性免疫的墼要组成成分，防獭素(defensins) 是其中～大家族。§防獬素是防御素家族中鲍的熏要成员，它主要分布于哺乳动物和 鸟类粒粘膜上皮组织魂，B被确认为黏膜表趸抗微生物屏障的组成成分。 醚蓠未见有关羊雌性生殖邋防衡素的研究报道，也未照生殪道防御素表达帮雌激 素、孕激素关系的研究报道。本文系统科究了蒙吉绵羊雌性生殖道§防御索(sBD—1) 的表达情况，并系统研究了生戆道§防御素的表达和雌激索、孕激素的关系。 1) 1运囊RT-PCR技术，蓄次从蒙古绵羊雌性生髓道各器官中证实，§一防御素(sBD 在蒙古绵羊输辨管、予寓、子寓颧、阴邋粘膜上皮内均有淡达，并盛sBDl程雌性生 殖道的各个器官疼的表达量不弱。其中在子宫颈躲表达量最高，子富和输鞘管内的表 达量次之，阴邀内的表达量最少。 2将蒙古绵羊输卵管组织sBD-I麴RT-PCR产物回收、地高辛探赞标记，应瘸艨 mRNA在蒙 位杂交技术，梭测sBD-lmRNA在输卵管组织中的定位。络果显示。sBD一1 古绵羊输郛管糙膜层上皮缨胞游离蠢麓胞蕨蠹表达；sBD-I在重有层、飘屡、结缔组 织中无表达；符合§一防御素主瓣表达予瓣膜表两缫胞的规律。 3用0。2§篱胰蛋邀酶消纯方法，成功获得了原代培养、传找培养的蒙吉端羊输卵 管上皮缨胞。燧形态学、免疫缀忧方法鉴定，证察所培养缨胞为上皮细胞。传三代缵 麓经染色落竣型分析表臻，传代培养细胞健康正常。可黻佟尧{爨究输舞管上皮缨胞 sBD-I表达与激素关系的研究模型细胞。 碡黄了探讨蒙吉绵羊雌性生殖道sBD-1酌表达量是稽与罐激素、孕激豢有关， 本实验对培养的蒙古缡羊输卵管上皮细臆进行激素添加实验。传代绷胞培羚4d，更换 无盎涛培养液lOh，添加激素培养，运蔫荧光定量RT-PCR方法检测sBD-1豹表达情况。 M 结采叛暴：(1)添加10…8M，10—9馘，10—1017-§～雌二醇缀均与对照组有裰避著差舅， 磊i0一11M17-§一雌二酵缝与对照缝无显著性差异。添加17-§一雌二醇情况下，不鬻 培养时闻对sBD-I的表达量无鼹著性影响。一定浓度的17-§一雌二孵对sBD—l表达宵 +匿家爨然辩学基愈辩助 30 促进作用。(2)添加i0—6瑟，i0。麓孕酮组与对照组有显著性差异，。10—8麓，i0—9骐孕酮 组与对照组差异极显著，i0—11M孕酮组与对照组无显著性差异。一定浓度的孕酮对培 养的输卵管上皮细胞sBD-1的表达有促进{乍用。(3)摸拟发情期激素浓度组(添加10—8 M17-B一雌二醇，10—9M孕酮)与对照组有极显著差异，模拟妊娠期激素浓度组(添 麴10—10i17-§一雌二醇，圭O一7蘩孕酮)与对照组有显著差异。17一§一雌二醇和孕酮 混合添加对sBD-1表达也有促进作用；因此雌性生殖道防御素的表达与雌性动物的生 理周期有关。由此说明，雌激素和孕激素是防街素表达的促进因素之一，僵不是防褥 索表达的必需因素。 5 为了进一步探讨雌激素、孕激素对雌性生殖道叠一防锯素表达的促进作用机 理，培养的输卵管上皮细胞在添加雌激素拮抗剂他莫营芬和孕激素拮抗剂米非司酮处 理后，继续添加相应浓度的雌激素、孕激素，运用荧光定量RT-PCR方法检测sBD一1 M17一B一 表达情况。结果显示，添加10—6M他莫昔芬作用一定时间之后，再添加10—8 雌二醇对sBD-I表达没有促进作用；丽添加10一番i米非司酮一定时间之后，荐添加lO书 M孕酮对sBD-1表达也不产生影响。雌激素、孕激素对B一防御素表达的促进作用是 通过与相应的雌激素受体和孕激素受体结合实现的。 作者简介：曹贵方，教授，电子邮箱：guifangcao@126．corn 体外模拟心肌微环境下胚胎干细胞向