铜绿假单胞菌烧伤病人分离株可移动的遗传元件研究.pdfVIP

及时有效的治疗是成功救治PE患者的重要环节，因此临床上应对PE作出及时早期诊断。本例患者栓 子较大，双肺动脉血流基本堵塞，能抢救成功即得益于早诊断、早干预、早治疗。明确诊断后即采 用了溶栓疗法。 铜绿假单胞菌烧伤病人分离株可移动的遗传元件 胡锡浩许小敏范友芬冯伟云 宁波第二医院(315010) 铜绿假单胞菌(Pseudomonas o ael-Uglnosa，PAEPAE菌已成为医院感染的重要病原菌，耐 药性较为严重。质粒、转座子、整合子等可移动的遗传元件(mobile elcmenm)是耐药基因 genetic 重要的载体。国内已有PAE菌的I类整合子遗传标记的检测报告。但PAE菌的质粒、转座子遗传标 记检测报告极少。为了解宁波第二医院病人临床分离PAE菌的质粒、转座子、I类整合子遗传标记 I 1)检测研究，现报告如下。 tnpU、merA)、I类整合子遗传标记(i11t 1．材料与方法 NCCLS)2007年版要求进行抗菌药物敏感性判断。药敏结果见表l。 浴2小时，改95。C水浴10分钟，加入Chelex一100 检测的模板液，．200C冰箱保存备用。 1．4基因检测 均为PCR法。各种靶基因引物序列和目的产物长度见表1。各种靶基因PCR扩增 体系均为：每反应体系Pl、P2引物各0．5pmol／L，dNTPs200各mmol／L，KCl DNA 2mmol／L，Iris—HCl(pH9．0)10mM，NP400．5％，BSA0．02％(wt／v01)，Taqpol 8mmol／L，MgCl2 o lU。总反应体积20¨1(其中模板液5pl 琼脂糖凝胶电泳，出现与阳性对照分子相当的目的条带为阳性。基因检测试剂盒、靶基因PCR引物 序列和阳性对照DNA由无锡市克隆遗传技术研究所提供。 1．5测序双脱氧末端终止法在美国ABI公司3730仪上进行。 表132株PAE菌烧伤病人分离株药敏结果(％) 表2靶基因PCR引物序列 基因名称 引物序列(5,3’) 产物长度 P1：AAGTGTrCAGGGr(X1唧CGC 272bp P2：AA灯GGTC户ITC触r(、1’ACATGAC P1：CGGTGATGATTTGCGAACGA P2：AGC比rI℃CGGTCoGCCr(]TA P1：CGCCAGTCTrGATGAGCCGG mpA 帅 P2：TTGCGG下陀GGTCC(近℃AAA PI：CCAACTGA孙j3CGGTGCCTT tnpU 403bp P2：CGGT盯GGr(Ⅺ贮1’兀℃GC merA P1：GACCAGCCGCAGTI℃G玎1’A 462bp P2：GCAGCA(G／C)GAAAGCTGCITCA int1 I PI：CCGAGGATGCGAACCACITC 373bp P2：CCGCCACTGCGCC(习『，rACCA