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马兜铃科中药材中马兜铃酸类成分检测方法的研究 罗兴平1 杨玲霞2 (1西北民族大学化工学院： 2甘肃省药品检验所) 【摘要】：本文使用未涂层石英毛细管(40．2cm×50肛m，有效长度为30cm)，采用高效毛细管电泳法 对马兜铃酸类成分的检测方法进行了研究，对影响HPCE分离的各参数(缓冲体系类型和浓度、缓冲溶液的 pH值、添加剂的类型及浓度、分离电压、分离温度等)进行了优化选择，确定了最佳分离条件。所建立的 方法具有多指标、快速、灵敏的特点，可同时检测六种马兜铃酸类成分(马兜铃酸A、马兜铃酸B、马兜铃 酸酸C、马兜铃酸D、7一羟基马兜铃酸A、去硝基马兜铃酸A)。 【关键词】：马兜铃酸；高效毛细管电泳 马兜铃酸被认为可能是造成中草药肾毒性的主要成纠1。3】，因此，建立中草药中马兜铃 酸类成分的检测方法对于指导临床安全合理用药有很重要的意义。有关马兜铃酸类成分的分 析检测，已经报道的文献主要是针对马兜铃酸A和马兜铃酸B两种成分，采用的方法主要 有薄层扫描法[41，高效液相色谱法【5卅，HPLC．MS法【71及高效毛细管电泳i!去【引，但是马兜 铃属植物中含有大量的其它马兜铃酸类成分，因具有相似的结构而同样具有很强的毒性【9】。 本文采用高效毛细管电泳法同时对六种马兜铃酸类成分(马兜铃酸A、马兜铃酸B、马兜铃 酸酸C、马兜铃酸D、7一羟基马兜铃酸A、去硝基马兜铃酸A)进行了检测，对于不含或 少含马兜铃酸A、马兜铃酸B，而含有其他马兜铃酸类成分的药品检测具有很重要的意义。 1仪器与试药 值的测定。Milli．Q水纯化系统(美国，Bedford公司)用于纯化水。 马兜铃酸A，马兜铃对照药材、广防已对照药材、青木香对照药材、天仙藤对照药材、 关木通对照药材和细辛对照药材均购自中国药品生物制品检定所，实验用药材均来自甘肃省 药品检验所标本室。马兜铃酸B，7一羟基马兜铃酸，马兜铃酸C，马兜铃酸D，去硝基马兜 铃酸A均自马兜铃中分离得到。硼砂、p—CD均购自北京医药化商店，所用其他试剂均为分 析纯，所有实验用水均为纯化水。 2实验部分 2．1电泳条件 未涂层石英毛细管规格为40．2cm×50I-tm，有效长度为30cm(河北永年光导纤维厂)， 毛细管第一次使用前依次用0．1mol／LNaOH冲洗5min、纯化水冲洗5min、缓冲溶液冲洗5min。 NaOH冲洗2min，纯化水冲洗2rain、 两次运行之间毛细管依次用纯化水冲洗2min，O．1mol／L 缓冲溶液冲洗2min。为了保证重现性，缓冲溶液每运行lO次后要进行更新。毛细管温度设定 作者简介：罗兴平(1968～)，男(汉族)，甘肃会宁人，西北民族大学化工学院教授，博士学位，主要从事药物分析及中药新药的 研究工作． 通讯地址：西北民族大学化工学校榆中校区：邮编：730030．E-mail：alu0009@sina．com 272 为25。C。紫外检测波长设定在254nm，分离电压为15kV，采用压力进样0．5psi，3s(1psi= 6894．76 I／L硼砂缓冲液含4mmol／L Pa)。缓冲液为60mmo D—CD作为添加剂。 2．2样品溶液的制备 取样品粉末lg，精密称定，置索式提取器中，加甲醇加热回流提取5h，提取液水浴蒸 干，残渣加甲醇溶解并定容至10mL量瓶中，作为样品溶液，临用前用0．451am的微孔滤膜 过滤，滤液作为进样溶液。样品名称及来源见表1． 表1样品来源 2．3对照品溶液的制备 精密称取六种对照品适量，用甲醇溶解配制对照储备液，浓度分别为：去硝基马兜铃酸 0．4928mg／mL，马兜铃酸D：O．1598mg／mL，7一羟基马兜铃酸A：O．8206mg／mL。使用时用 甲醇稀释至所需浓度。 2．4缓冲溶液的配制 mo 缓冲溶液的制备：取适量的100m1／L硼砂缓冲液和10mol／Lp—CD，用纯化水稀释至 所需浓度，用0．1mol／LNaOH或0．1mol／L HCI调节其pH值，使用前用0．451am的滤