微孔板筛选法用于杀菌剂高通量筛选的研究.pdfVIP

中国化工学会农药专业委员会第十四届年会论文 微孔板筛选法用于杀菌剂高通量筛选的研究 纪明山’王威范艳菊宋鹏 (沈阳农业大学植物保护学院，沈阳1 10161) 摘要：分别用菌丝生长速率法、孢子萌发法和微孔板筛选法研究了异菌脲、苯醚甲环唑、百菌清、嘧霉胺、 嘧菌酯对番茄灰霉菌菌丝的抑制效果，结果表明：用微孔板筛选法和孢子萌发法测得的五种杀菌剂对番茄 灰霉菌的抑制效果趋势基本一致，微孔板筛选法与孢子萌发法的各抑制中浓度EC50值接近。微孔板筛选 法用于农药高通量筛选时，可靠性程度虽稍低于孢子萌发法，但其检测方法的快速性要明显高于孢子萌发 法和菌丝生长速率法，适用于大量化合物的初筛。 关键词：杀菌剂；孢子萌发法；菌丝生长速率；高通量筛选；微孔板筛选法 现代农业对于农药的依赖越来越强，因此农药的生产和使用越来越广泛【11，但随着环境 和消费安全的呼声日益提高，以及有害生物抗药性的产生使农药使用寿命缩短，使得新农药 的创制与开发越来越迫切，也越来越困难。据统计，一个高效、低毒、环境友好型新农药的 成功开发，目前需要合成筛选8万个化合物，耗资上亿美元．这对药物开发中化合物的合成 与筛选都提出了新的挑战‘21。我国多数情况下都是采用孢子萌发法和菌丝生长速率法进行杀 菌剂的筛选，而随着新农药创制技术的快速发展，要求建立一种简单快速的筛选新化合物的 方法。本试验初步建立一种微孔板筛选方法，通过该方法与孢子萌发法和菌丝生长速率法相 关性的比较，探索微孔板筛选法在杀菌剂筛选中应用的可行性。 1实验部分 1．1试剂与仪器 cinereaPers．)由沈阳农业大学植保学院农药学实验室提供 番茄灰霉病菌(Botrytis 40％嘧霉胺悬浮剂，北京北农华大公司生产：5009／L异菌尿悬浮剂安万特作物科学公司 产品；2509／L嘧菌酯悬浮剂，拜耳作物科学公司；40％百菌清悬浮剂，江苏新沂丰乐化工有 限公司；10％苯醚甲环唑水分散粒剂，拜耳作物科学公司；其他试剂均为分析纯，购自沈阳 沈一精细化学品有限公司生产；1．2．试验方法 1．2．1微孔板筛选法 配置l×105／mL番茄灰霉菌孢子悬浮液【3】，本试验各孢子悬浮液均采用此浓度。配置药 作者简介：纪明山(1966-)，男，河北任丘，沈阳农业大学教授。Tel：(024 E-mai l：Jimingshan@163．tom ．．408．． 中国化工学会农药专业委员会第十四届年会论文 IX 剂：苯醚甲环唑、异菌脲、百菌清3种药剂用无菌水配制成0．0625、0．125、0．25、0．5、1．0 g／mI。 等5个梯度浓度；嘧菌酯配制成2、4、8、16、32la∥mL等5个梯度浓度；嘧霉胺配制成8、 16、32、64、128 u∥n儿等5个梯度浓度。 在操净台中，将已制备好的PDA培养基50|lL分别加入酶标板微孔中，待培养基冷却后 u u 放于紫外灯下灭菌30min，后移取孢子悬浮液18L和各配置好的药剂2L，每个处理设四 次重复，每个试验重复三次。以等量的无菌水为对照，置于酶标仪中450nm波长下测量吸光 48h、96h、 144h后分别测量一个试验的酶标板，检测各处理的吸光值。 1．2．2孢子萌发法(悬滴法) u 用无菌水配制成苯醚甲环唑、异菌脲、百菌清3种药剂0．25、0．5、1．0、2．0、4．0