骨碎补水提液促进大鼠成骨细胞OPG+mRNA表达的研究.pdfVIP

中国畜牧兽医学会中兽医学分会2011年学术年会论文集 参考文献： 【l】谢仲权．天然物中草药饲料添加剂研究方法【M】．北京：中国农业出版社，2001． 中国中医药出版社， 2002 【2】张珍玉．中医学基础【M】．第2版．北京： 6(2)18·23 【3】杨正时．伤寒杆菌活菌计数影响因素探讨【J】．中国人兽共患病杂志1990 【4】4 王玉东．鸡白痢沙门氏菌病的发病新特点及综合防治【J】．中国家禽200123(11)18．19 骨碎补水提液促进大氛成骨细胞OPGmRNA表达的研究 赵晓燕+，刘钟杰”，李彩虹，李琴，邢晓旭，田丹，韩博 (中国农业大学动物医学院，北京100193) 骨碎补味苦、性温，入肝、肾经。始载于《本草拾遗》，主治肾虚腰痛，跌打闪挫，骨伤，风湿痹 痛。是补肾中药中的佼佼者，与其他中药同等条件下作用于成骨细胞株，作用最为突出，促增殖作用甚 至强于雌激素[11，推测骨碎补是潜在的植物性雌激素。由成骨细胞分泌的OPG影响着破骨细胞的分化 成熟，继而影响骨骼是进行吸收还是重建。骨碎补多项临床及动物试验表明，其检验指标与OPG互为 联系【2】。国际通用的一线治疗骨质疏松药物之一的雌激素，通过改变骨组织微环境中OPG／RANKL比值 起作用的，且这个作用与雌激素受体通路相关[3-51。本试验以大鼠成骨细胞为模型，假定骨碎补水提液 能调节OPGmRNA的表达，且作用与雌激素受体通路相关。 l材料 1．1试验动物和菌株 新生24h内的SD大鼠(北京兴隆试验动物场)，大肠杆菌DH5a感受态细胞(全式金生物技术有 限公司)。 1．2药物与试剂 182 骨碎补(北京同仁堂马连洼店)：雌二醇(中国药品生物制品鉴定所)；ICI780(Sigma)；鼠源性反 转录酶(Promega)：反转录试剂盒、pEASY-T3Cloning GreenPCR 量胶回收试剂盒、小量质粒提取试剂盒(北京索莱宝科技有限公司)；Smart Mix(天根生物科 技有限公司)。 2方法 2．1药液制备将骨碎补饮片和蒸馏水按1：10(W：v)的比例混合，浸泡30min，文火加热沸腾25 min，滤出药液后再加8倍蒸馏水煮沸25 r／min离心10min， rain，过滤，合并两次滤液，混匀，2500 取上清液，旋转蒸发浓缩成浓度为2g／mL的生药液，调pH至7．2～7．4，用0．22pm的微孔滤膜过滤除 菌，分装，·4℃密封保存。临用前用DMEM完全培养液分别配制成浓度为10 mg／mL、lmg／mL、0．1 mg／mL、O．Olmg／mL、0．001mg／mL的7组骨碎补培养液，以不加药物的DMEM完全培养液作为对照组。 。。通讯作者l刘钟杰，教授，E-mail：liuzhon函iecau@163．c,om． 129 中国畜牧兽医学会中兽医学分会2011年学术年会论文集 2．2细胞培养、鉴定 参照吴培福方法，体外培养大鼠颅骨成骨细胞【6】。并通过形态学观察、瑞士染色和钙化结节染色的 方法对所培养的细胞进行鉴定，鉴定成骨细胞培养成功。 采用第三代细胞进行试验，细胞按lx 液、阳性对照组换为含雌二醇完全培养液、阴性对照组换为完全培养液，或者试验组换含10mg／mL骨 0。7 mol／LICI182 碎补水提液+l 780的完全培养液，作用48h后提取总mRNA。 2．3细胞总mRNA的提取 按照说明书，用Trizol法提取细胞总RNA，直接进入反转录体系或一80℃保存。 2．4 8II RT-PCR取RNAL，