异源位点特异性重组系统在植物中的研究StudiesonHeterogeneticSite-SpecificRecombinationS.pdfVIP

遗传 HEREDITAS(Beijingr21(5):62^-661999 异源位点特异性重组系统在植物中的研究① 易厚富，王金发 （中山大学生物系，广东广州 510275) StudiesonHeterogeneticSite-SpecificRecombinationSystemsinPlant YIHou-fu,WANGJin-fa 旧epartmentofBiology,ZhongshanUniversity,Guangzhou510275,China) 中图分类号：Q943 ：A 文章编号：0253-9772(1999)05-0062-66 现在对位点特异性重组系统(s（ite-specificrecombinationsystem）研究的很多，它们都源于低等生物，由于都具 有独特的位点重组特异性，所以吸引了大批研究人员在真核生物中进行了广泛的研究．本文主要综述了在高等植 物中研究的位点特异性重组系统的来源、重组机理、重组方式、重组中存在的问题及位点特异性重组系统研究的 应用前景和意义等． 位点特异性重组系统 位点特异性重组是指在重组酶介导下，在特异的重组位点间发生重组，导致重组位点间交互交换的一种精确重 组形式。位点特异性重组始于对A噬菌体溶源化过程的研究。A噬菌体通过自身位点artP和大肠杆菌位点attB 整合到宿主染色体上，实现溶源化．整合上去的原噬菌体又可以通过其两侧的attL,artR位点切离下来，形成完 整的又噬菌体。人们对又噬菌体及其他一些位点特异性重组系统的重组酶、重组位点、重组辅助因子、重组机理 等进行了深人的研究1,〔23)，能够在植物中发生重组反应的，目前主要有三类：Cre/to厂2-15)、FLP/FRT(16-201 和R/R扩21,22)。其中Cre/lox系统研究的最早(2,3)、最广泛2-〔15)、也最深人“9·,11,12)． Cre/lox重组系统来源于大肠杆菌噬菌休P1(2,23)，Cre(causerecombination)jE位点特异性重组酶，由P1基 因编码，分子量38.5kDa;Cre识别的重组位点是lox(locusofcrossing-over),长34bp，中间是8bp的核心序列，两 边为 13bp的反向重复序列．FLP/FRT重组系统来自芽殖酵母S（accbaromycescerevisiae)的环状2p质 粒(14,23),FLP为位点特异性重组酶，由2p质粒上的帅 基因编码，分子量48kDa;FLP识别的重组位点是 FRTF(LPrecombinationtarget),相似于lox,基本结构长34bp，中间是8bp的核心序列，两边是l3bp的反向重复 序列，另有一个13bp的冗余重复。R/R：重组系统源于接合酵母Z（ygosaccharomycesrouxii)的质粒pSRl(19,23)， R为重组酶，由声R1质粒上的R基因编码；R识别的重组位点为Rs(Recombinationsite),基本长度31bp,中间是 7bp的核心序列，两边为12bp的反向重复序列，另有4段冗余重复。 2三类位点特异性重组系统的重组酶、重组位点和重组机理 三类位点特异性重组系统的重组酶Cre,FLP和R均属于A整合酶家族1,〔23)，均为单链多肤，且具有极高的 结构相似性：狡基端有40个氨基酸是高度同源的，其中三个不变氨基酸His-Arg-Tyr在介导重组时是至关重要 的．重组位点结构也具有相似性23〔)，基本结构由34b试或31bp)Aft成，中间是非对称的8b试或7b动的核心序列， ①收稿日期：1997-07-20;修订日期：1999-01-03 作者简介：易厚富(1972-),男，硕士学位，专业方向：分子遗传学。 5期 易厚富等：异源位点特异性重组系统在植物中的研究 63 两边为13bp(或12b功的反向重复序列。中间核心序列是链的断裂、重接、Holliday中间体的分枝迁移等交换过 程发生地，其不对称性暗示了整个位点的方向性，具有方向性的重组位点的不同定位形式 同（向或反向）决定重组方 式 1〔,23)。核心序列两边的反向重复序列是重组酶识别和结合的位点2〔3)． 三类系统的重组机理也相似