PTPA对PP2AC+Y307磷酸化水平的作用及其机制.pdfVIP

PTPA对PP2A Y307磷酸化水平的作用及其机制 C 中文摘要 阿尔茨海默病 （Alzheimer’s disease, AD)是一种渐进性的记忆丢失和认知功 能损伤的神经退行性疾病，AD 患者脑内两大特征性病理学改变是神经元内形成 大量神经原纤维缠结(neurofibrillary tangles, NFT)，以及细胞间大量老年斑（senile plaques, SP ）的沉积。其中，神经原纤维缠结的主要成分是异常磷酸化的tau蛋白。 人体内有107个酪氨酸磷酸酯酶，其中PP2A属于PPP家族，在AD发生发展过程中 发挥重要的磷酸酯酶作用，影响着tau的磷酸化。PP2A催化亚基的活性调节方式 主要有：改变PP2A 的表达水平以及对PP2A 翻译后修饰——Leu309 甲基化和 C C Tyr307磷酸化。PTPA是一种普遍存在于哺乳动物组织和细胞的蛋白，PTPA能够 通过改变PP2AC空间构象和增加Leu309位点甲基化水平来增强PP2A磷酸酯酶的 活性，但对PP2A 的Tyr307位点磷酸化水平是否存在作用，目前尚不清楚。 C 目的：研究PTPA对PP2A Tyr307位点磷酸化水平的影响及其可能机制。 C 材料和方法：构建PTPA 野生型质粒 （wt-PTPA ）和特异性针对PTPA 基因 序列的RNA 干扰质粒pSUPER-siPTPA （siPTPA ），分别转染入HEK293/tau 细胞 系，蛋白免疫印迹技术检测tau 蛋白各位点磷酸化水平，检测与tau 磷酸化相关 的激酶、PP2AC 蛋白、PP2AC 去甲基化、磷酸化水平的变化。用PP2A 活性试剂 盒检测转染PP2A 活性变化；用细胞免疫荧光观察PTPA 与tau 的磷酸化位点的 细胞共定位；用RT-PCR 方法检测PTP1B 转录水平变化。 结果：（1） wtPTPA有效地增加了PTPA的表达，pSUP -siPTPA有效地降低了 PTPA的表达；（2 ）293/tau细胞内过表达PTPA可以降低tau磷酸化水平，敲除PTPA 使tau蛋白磷酸化水平增加；（3 ）调控PTPA表达水平可改变PP2A活性，但对 GSK-3没有影响；（4 ）OA可逆转过表达PTPA后对tau磷酸化水平的降低；（5 ） 过表达PTPA能降低PP2A Y307磷酸化水平；PTPA敲除后PP2A Y307磷酸化水平 C C 升高；（6 ）过表达PTPA能增加PP2AC Y307位点磷酸酯酶PTP1B的转录和蛋白表 达水平；PTPA敲除后PTP1B的转录和蛋白表达水平降低，而其他引起PP2AC Y307 变化的激酶没有发生变化。 结论：PTPA 调控PTP1B 的mRNA 和蛋白水平而影响PP2A 307 位点酪氨酸 C 2 磷酸化。 关键词：蛋白磷酸酯酶活化因子；蛋白磷酸酯酶-2A；酪氨酸 307；蛋白酪 氨酸磷酸酯酶1B；tau蛋白；磷酸化 3 The effects of PTPA on PP2A Y307 phosphorylation C level and the underlying mechanism Postgraduate: Yunjuan Nie Supervisor: Prof. Xinwen Zhou Abstr