茌梨果实内切-β-1,4-葡聚糖酶基因的克隆及生物信息学分析.pdfVIP

● C T l ●_RICULTURAE 华北农学报 ·2013，28(3)：53—57 __RE囊Ll-SI—IC● 茌梨果实内切-i3-1，4-葡聚糖酶基因的 克隆及生物信息学分析 张晓菲，张夏南，王 然，张新富，杨绍兰 (青岛农业大学 园林园艺学院，山东 青岛 266109) 摘要 ：以成熟的莱阳茌梨果实为试材 ，应用 同源克隆和 RACE方法从茌梨果 肉中克隆到 内切一B一1，4-葡聚糖酶基 因的一个 同源基 因cDNA的全长序列，命名为 PbEG，其碱基长度为 1971bp，PbEG的开放阅读框编码 493个氨基酸 ， 相对分子量为54．596lkDa，等 电点为 9．14；PbEG编码 的蛋 白属于糖基水解酶第 9家族 ，不含有跨膜 区域但在 N一端 含有一段信号肽 。其编码氨基酸同源性分析表明，茌梨 PbEG基 因与蓖麻 EG基 因同源性较高，达到 84％，其次是豌 豆和葡萄 。 关键词：茌梨；内切-B-1，4一葡聚糖酶基因；生物信息学 中图分类号：Q78 文献标识码 ：A 文章编号：1000—7091(2013)03—0053—05 TheGeneCloningandBioinformaticsAnalysisofEndo—B-1，4-glucanas GeneofChiliPear ZHANG Xiao-fei，ZHANG Xia—nan，W ANG Ran，ZHANG Xin—fu，YANG Shao—lan (CollegeofHorticulture，QingdaoAgriculturalUniversity，Qingdao 266109，China) Abstract：Onefull-lengthcDNAsequenceofhomologousgeneendo-B一1，4-glucanasfrom rusbretschneideri Rehd．Cv．Chilipearwasclonedbypolymerasechainreaction (PCR)andRACEmethod，whichwasnamedas PbEG．ThePbEGwas1971bpandtheopenreadingframeencoded493aminoacids，whiletheestimatedmolecular weightandisoelectricpointoftheputativeproteinwere54．5961kDaand9．14．TheproteinencodedbyPbEG be— longedtoGlycosyl—hydrolases—family一9．Therewasnomembrane-spanningdomainintheproteinbutasignalpeptide intheN-terminus．AndthededucedaminoacidshomologyanalysisindicatedthatPbEG hasahighhomologywith RcEG(84％)． Keywords：Pear；Endo-p一1，4-glucanas；Bioinformatics 果实的成熟软化是一个复杂的过程。植物细胞 物产生的一种水解酶。具有 1，4-B-葡聚糖主链的多 壁的主要成分包括果胶 、纤维素、半纤维素、蛋 白质 聚糖 ，如纤维素等分子能被 EGases催化水解 ，并被 等，研究认为，果实的成熟软化过程中细胞壁成分果 随机作用降解成为糊精或寡聚糖 。研究表明，内 胶 ，纤维素，半纤维素等会发生降解 ¨ 。多种酶类 切一p—l，4-葡聚糖酶对植物体的生长发育具有广泛作 参与 了果实 的后 熟软化 ，如 多聚半乳糖醛酸酶 用，与细胞伸长 、果实成熟软化 、组织器官 (PG)、3-半乳糖苷酶 (13．Ga1)、果胶 甲酯酶 (PME)、 脱落 ¨ 等有密切关系。 目前，已从拟南芥 引、 扩张蛋 白(Ex