能够在苏云金芽孢杆菌营养期表达的载体的构建及新型杀虫蛋白基因vip的鉴定.pdf

能够在苏云金芽孢杆菌营养期表达的载体的构建及新型杀虫 蛋白基因rip的鉴定 摘要 本研究的工作内容分为两个部分，一个是苏云金芽孢杆菌营养期 表达载体的构建并使用构建好的载体在苏云金芽孢杆菌无晶体突变株 中表达crylAc31基因。另外一个是鉴定新型杀虫蛋白基因v勿。 在第一部分的工作中，我们以苏云金芽孢杆菌cry3Aa基因启动子 为模板，设计了一对引物(C3．5／C3—3)，并利用这对引物从苏云金芽孢 杆菌拟步虫甲亚种(Bt 测序结果显示它与预计的启动子片段一致，含有能够在研中表达的元 件。利用平末端连接，我们将该DNA片段克隆到穿梭质粒载体pBU4 上，构建了一个新的表达载体pBUC3。随后通过电转化，我们将含有 在第二部分的工作中，我们设计了5对通用引物，采用PCR的方 法鉴定v勿基因。在对本实验室分离的204株苏云金芽孢杆菌的总DNA 白分泌情况，随后我们对其进行了SDS．PAGE验证，验证结果表明在 因没有同源性，利用生物信息学进行分析后也发现，这段序列没有足 够长的ORF，并不能编码80kDa左右大小的蛋白质。 1基因的表 关键词：苏云金芽孢杆菌营养期表达载体构建crylAc3 达新型营养期杀虫蛋白rip基因的鉴定 Il CONSTRUCTIONOFTHEVECTORFORGENE EXPRESSIONDURINGVEGETATIVEPHASEIN 召爿C旺三晒Z日【傻，ⅣGZE7、7：SZSANDIDENTIFIC√盯IONOFA NEWINSECTICIDALGENEv／P ABSTRACT Thisresearchworkisdividedintotwo istheconstructionof parts，one thevectornamed for in geneexpressionduringvegetativephase pBUC3 Bacillus andthenonthebasisoftheconstructedvectorwe thuringiensis Ac31 inno mutantstrainofBacillus expresscryl gene crystal thuringiensis． Anotheristheidentificationofnewinsecticidal genev／p． Inthefirst used asthe to part，we cry3Aagenepromotertemplate a of a DNA amplified575bp designpair primers(C3-5／C3-3)，then fromBt resultshowsthatthis fragment subsp．tenebrions．Thesequencing isconsistentwiththe contains fragment