几种物理因素对黄芩细胞悬浮系生长与黄芩苷含量变化的影响.pdfVIP

第3O卷第4期 齐 齐 哈 尔 大 学 学 报 Vo1．30。No．4 2014年 7月 JournalofQiqiharUniversity July，2014 几种物理因素对黄芩细胞悬浮系生长与 黄芩苷含量变化的影响 顾长海 ，张东向，刘丽杰 ，赵静，卢蓉蓉，王洪杰，佟鑫鑫 (齐齐哈尔大学 生命科学与农林学院，黑龙江 齐齐哈尔 161006) 摘要：为建立稳定的黄芩细胞悬浮系，采用悬浮细胞培养技术，研究了接种量、光照与否和pH值等 3种物理因 素对黄芩细胞悬浮系生长与黄芩苷含量变化的影响。结果表明，黄芩细胞悬浮系浊度随培养时间呈现 “s”形变化 曲线；采用Ms基本培养基，添加0．2mg·L-。2,4一D、2．0mg·L6-BA和3％蔗糖，选取 1．0g· 的接种量、pH5．8， 并在25℃条件下进行暗培养，最有利于黄芩苷的积累，黄芩苷含量最高可达 7．425I-tg·g-IFw。 关键词：黄芩；细胞悬浮系；接种量 ；pH；黄芩苷 中图分类号：$567．239 文献标志码：A 文章编号：1007—984X(2014)04—0067—04 黄芩 (ScutellariabaicalinsGeorgi)又名黄金茶、山茶根、魁芩 、黄金条根等，是唇形科 (Labiatae) 黄芩属多年生草本植物。黄芩的根系是一种传统的中草药，临床上黄芩具有清热、泻火、解毒、止血、安 胎等功效…。近年来医药学研究表明，黄芩有效成分黄芩苷具有抗肿瘤、抗病毒和提高免疫机能等作用 。 由于连年采挖，黄芩的野生资源 日益匮乏。黄芩组织培养技术的研究不仅对黄芩资源保护有着重要意义， 而且还能节省土地 ，并且快速生产黄芩的活性成分，具有重要的实践价值。为建立稳定的黄芩细胞悬浮系， 在原有工作的基础上，本文着重研究了接种量、光照与否和pH值等 3种物理因素对黄芩细胞悬浮系生长 与黄芩苷含量变化的影响。 1 材料与方法 1．1 实验材料 黄芩细胞悬浮系：南齐齐哈尔大学植物代谢生理学实验室提供。黄芩细胞悬浮系是由温室盆栽的黄芩 根诱导的进行继代培养的愈伤组织为材料 ，进行黄芩细胞悬浮培养及其细胞生长最佳条件的研究。 1-2 黄芩细胞悬浮系继代培养 取本实验室继代培养的长势 良好的淡黄色黄芩细胞悬浮系进行继代培养材料，按照表 1固体培养基配 置方法进行配置，配置若干瓶灭菌待进行继代培养，为悬浮培养提供材料。选取长势良好无褐化的愈伤组 织切取大小相似的小块，每瓶 3块，进行培养周期20d。 1．3 单因子试验设计 1．3．1 接种量的水平设定 、 为研究接种量对黄芩细胞悬浮系黄芩苷含量的影响，我们采用单因子实验设计方案。培养基采用标准 的MS培养基，蔗糖浓度 3％，pH5．8，2．0rag·IJ．的6-BA。接种量的水平设定为O．5g-瓶一，1．0g·瓶一， 1．5g·瓶～。分别测定培养过程中黄芩苷含量的动态变化，实验设3次重复。 1．3．2 光照条件 的设定 为研究 简光照条件对黄芩细胞悬浮系黄芩苷含量的影咐 采用单因子实验设计方案。培养基采用标 准的MS培养基，蔗糖浓度 3％，pH5．8，0．2mg·L一的2,4一D。光照条件水平的设定为24h光照 (全光照)， 收稿日期 ：2014—04—21 基金项目：黑龙江省内然科学基金资助 (C201013) 作者简介 ：顾长海 (1969-)，男，黑龙江克山县人，剐教授，硕士研究生，主要从事植物学方而的研究，qdgch@163on『n 齐 齐 哈 尔 大 学 学 报 2014经 8h光~／16h黑暗 (一定光照)，24h黑暗 (无光照)。分别测定培养过程中黄芩苷含量的动态变化，实验设 3次重复。 1．3．3 培养基初始 pH值的水平设定 为研究pH值对黄芩细胞悬浮系黄芩苷含量的影响，采用单因子实验设计方案。培养基采用标准的MS 培养基，蔗糖浓度3％，pH5．8，0．2mg·L～2,4一D+2．0mg·L『6‘一BA。pH值的水平设定为5．4，5．8，6．2。分 别测定培养过程