强制性使用运动疗法对大鼠脑缺血后神经可塑性的影响.pdfVIP

ChineseJournalofRehabilitationMedicine，Ju1．2014，Vo1．29，No．7 脑缺血后神经功能恢复非常有限，幸存者中大 术缝线将皮肤缝在一段3cm长的铁丝上 (铁丝尾端 多遗留不同程度的神经功能缺损，后期的神经康复 与绕在胸部的铁环相连)，然后用石膏缠绕固定该肢 治疗非常重要。强制性使用运动疗法(constraint．in． 体，部分限制其活动，固定后仍饲养于原笼中。手术 ducedmovementtherapy,CIMT)是近年来备受关 后第8周解除固定。 注的一种新的康复治疗技术，主要通过限制健侧肢 1．2．3 Bederson评分：参照改良的Bederson评分标 体活动，达到强化使用和训练患侧肢体的目的，进而 准 ，分别在脑缺血后 1、2、4、8周进行神经功能缺损 促进患肢的运动功能恢复。强制性使用运动疗法用 评分 。 于临床脑卒中患者的康复治疗已获得显著疗效n ， 1．2．4 原位杂交技术检测生长相关蛋 白growth．as． 得到国、内外学者的一致认同和肯定。本研究观察 sociatedprotein(GAP一43)及 SYPmRNA的表达 ：每 了CIMT对脑缺血后神经功能重塑的影响，并探讨 组随机取5只大鼠于治疗2周、4周、8周后，经4％的 其作用机制。 多聚甲醛灌流固定后，断头取脑，经多聚甲醛后固 定、梯度脱水、石蜡包埋 ，将包埋后的脑组织经切片 1 材料与方法 机切为5gm厚切片烘干备用 。采用原位杂交技术 1．1 实验动物 检测GAP．43及SYPmRNA的表达。 健康 SD大 鼠90只，雌雄不拘 ，质量 250— 1．2．5 免疫组化观察GAP一43及突触素(synaptophy． 280g。将其随机分为强制性使用运动组(CIMT组)、 sin，SYP)的表达：①GAP．43、SYP免疫组织化学检 MCAO模型组和假手术组(Sham组)，每组3O只。 测方法：切片常规脱蜡至水后依次加入3％H：O 甲醇 1．2 实验方法 溶液，室温，10min；正常山羊血清，室温，10rain；分别 1．2．1 左侧大脑中动脉闭塞局灶脑缺血模型的制 加入抗GAP．43抗体和抗SYP抗体，置湿盒4℃过夜； 备：方法参照文献口，用3．5％水合氯醛 lml／kg腹腔麻 生物素标记的二抗，室温，10min；链霉卵白素一过氧 醉大鼠后 ，取左侧颈部直切 口，分离左颈总动脉 化物酶溶液，室温 ，10min。然后滴加新鲜配制的 (CCA)、颈 内动脉 (ICA)、颈外动脉 (ECA)，电凝 DAB．HO显色液，室温显色5—10min。自来水冲 ECA分支甲状腺上动脉、枕动脉，结扎颈内动脉重要 洗，脱水 ，透明，苏木素复染细胞核 l_3min，再水洗 分支翼腭动脉。离断ECA，假手术组到此步为止。 10min以上。梯度酒精脱水 ，二甲苯透明，中性树胶 从ECA插入24号静脉留置针，将针芯拔出，取动脉 封片，光镜下观察。细胞呈紫蓝色。阳性细胞胞浆呈 血 0．5— 1．0ml，4000r／min离心 lmin。按 5：1吸取血 棕黄色，显微镜下观察，照相。②每张切片结果在40 浆及少量红细胞共 100gl，加入50万U／L凝血酶 1gl 倍物镜下观察显色的有无及强弱，用计算机图像分析 及 lmol／L氯化钙20gl，立即混匀，吸入麻醉导管，稍 系统TD一2000处理，采集图像输入计算机，以灰度计 待片刻，将血栓注人盛有生理盐水或PBS的玻璃皿 算所选视野阳性染色的单位面积(阳性细胞的面积占 内，用剪刀剪成多个长1．5—2mm的栓子，制成直径 所选整个视野面积的百分比)，每张切