不同分离及培养方法对大鼠骨髓间充质干细胞生长增殖和生物学特性的影响.pdfVIP

2009；40(4)：719—723 Ji四川大学Un学iv报‘医Sc学idSichuan版EScEd)))…一。…… ’一 Univ(Med ● 技术与方法 不同分离及培养方法对大鼠骨髓间充质 干细胞生长增殖和生物学特性的影响* 贾贵清1，张明鸣1，杨 平1，程惊秋2，陆燕蓉2，伍晓汀1△ 1．四川大学华西医院胃肠外科(成都610041)I2．四川大学华西医院卫生部移植工程与移植免疫重点实验室 【摘要】目的探讨获得大量、高纯度、高活性骨髓间充质于细胞(BMSCs)的有效途径。方法用密度梯度 离心法和贴壁法分离纯化BMSCs，在无血清、含小牛或胎牛血清以及不同体积分数的胎牛血清的培养基中培养， 传代扩增，观察各组细胞形态、生长特性，测定生长曲线，免疫细胞化学染色鉴定表面抗原，电镜观察细胞显微结 构。结果密度梯度离心法可获得较纯的原代细胞，但细胞增殖缓慢，容易老化；贴壁法分离的细胞生长增殖迅 速，经传代换液，第4代细胞基本纯化}小牛和胎牛血清均能促进BMSCs生长增殖，但在体积分数为0．12的胎牛 特性。结论经多次换液、严格控制传代消化时间(2～3min)和酶浓度(2．5g／L)，采用贴壁纯化法在含体积分数 为0．12的胎牛血清L-DMEM培养液中培养可获得大量、高纯度、高活性的BMSCs。 【关键词】问充质干细胞细胞培养细胞分离骨髓大鼠 【中图分类号】R331．2，Q2-33 Isolation the and CharacteristicsofRat EffectsoftheDifferentCultureand Methodson Growth，ProliferationBiology BoneMarrow StemCellsJ lA t LU Mesenchymal Gui-qing．zHANGMing-ming，YANGPing，CHENGJing-qiu Gastrointestional Yah-tong。WUXiao-ting△．Departmentof Surgery，W；盯ChinaHospital，Sichuan 610041，China University，Chengdu To Ssuitablemethodfor and ofbone [Abstract]Objectiveexplore isolation，purificationmultiplication stem andadherence marrow cells(BMSCs)．Methodsgradientcentrifugation separation mesenchymal Density methodswere forisolationofBMSCsfromWistarrats．Thecellswereculturedand incultur