泛素-蛋白酶体抑制剂诱导头颈部鳞癌细胞凋亡实验研究.pdfVIP

泛素一蛋白酶体抑制剂诱导头颈部鳞癌细胞凋亡的实验研究 研究生：刘宪斌 ． 专业：外科学 导 师：张 彬 教授 中文摘要 目的 探讨内质网应激在泛素．蛋白酶体抑制剂MG．132诱导人舌鳞癌细胞株 11 Tca一83细胞凋亡中的作用及其相关机制。 方法 11 一使用含1O％胎牛血清的RPMI．1640培养基常规培养Tca．83细胞，将指数生 长期细胞随机分为5组：培养液中分别加入1640培养基(阴性对照组)、毒胡萝b 32组。继续培养18h后， 素59mol／L，(阳性对照组)、和10、20、301amol／L的MG—l 1 进行如下实验：MTT实验在490nm波长下测吸光度，检测MG．132对Tea一8l3细胞 活性的影嗬‘∥采用荧光染料Hoechst33258染色，荧光显微镜观察细胞核染色质的 形态学，改变；琼脂糖凝胶电泳检测凋亡细胞中DNAladder的形成： mRNA的表达；Western (glucoseregulatedprotein78，GRP78)、caspase-12 blotting 2蛋白的表达；ELISA检测人泛素蛋白连接酶 检测葡萄糖调节蛋白78、caspase—l E3浓度。 结果 ．‘MTT实验：阴性对照组、毒胡萝b素组和低、中、高浓度MG一132组的吸光 1 度分别为0．55士0．265、0．170士0．690、0．292+0．420、0．2224-0．】06、0．148+0．205， 与阴性对照组比较，均有统计学意义，其中低浓度MG．132组P0．05，其余各组 P0．0l；Hoechst MG．1 11 32组细胞出现典型的细胞核染色质凋亡形态，且Tca．83细胞凋亡形态学 的改变与MG一‘132存在浓度依赖性；DNA片断化检测：MG．1 32各组和毒胡萝b素 组梯形条带灰度较对照组明显增加，并有浓度依赖关系，尤其以高浓度组明显； 流式细胞仪检测：阴性对照组、毒胡萝b素组和MG．132各实验组凋亡率分别为 1 l 检测结果：MG．1 32可引起GRP78、caspase．1 检测结果：MG一1 2的蛋白表达增强：ELISA检测结果： 32可引起GRP78、caspase．1 阴性对照组、毒胡萝卜素组和MG．1 32实验组人泛素连接酶E3的表达量分别为 40．88+4．52、38．96±0．33、28．75±2．28、1 8．16±0．65和8．85±0．72。 结论 l I l、泛素．蛋白酶体抑制剂MG．132可诱导人舌鳞癌细胞株Tca．83细胞的凋 亡： 2、MG．132可引起Tea．8113细胞的内质网应激，表现在GPR78的mRNA及蛋 白的表达增加； ll 3、MG一132可引起Tea．8 3细胞内质网应激反应性凋亡，表现在剪切、活化