三种食源性致病菌多重PCR检测方法的建立及初步应用.pdfVIP

·177· 文章编-号-：1673-8640(2009)03-0177-05中图分类号：Q503 文献标识码：A 三种食源性致病菌多重PCR检测方法的建立及初步应用 沙丹， 凌霞， 肖 勇， 吴家林， 张敬平 (无锡市疾病预防控制中心，江苏无锡214023) 摘要：目的建立快速检测沙门菌、变形杆菌和金黄色葡萄球菌的多重聚合酶链反应(PCR)方法。方法 本研究依据沙门菌侵袭基因正调节蛋白(hilA)基因、变形杆菌溶血素(hpmA)基因和金黄色葡萄球菌特异性 Premier pSa-442序列，运用Primer5．0分别设计3对特异性引物，预计PCR扩增的目的基因片段分别为为580 bp、401bp、256bp。通过对单管多重PCR扩增的特异性、敏感性分析以及建立L16(43)正交试验对单管多重 PCR扩增条件如引物浓度、dNTP浓度和Tm值等的优化，建立了快速同时检测3种食源性致病菌的单管多重 PCR方法。结果该方法检测的灵敏度分别为：94．07 pg沙门菌DNA，140．85ng变形杆菌DNA，1．4lng金黄色 葡萄球菌DNA。模拟检测食品中的混合3种菌，4h培养后样品的最低检测限度分别为：沙门菌100菌落形成单 位(CFU)／mL、变形杆菌101 CFU／mL、金黄色葡萄球菌100CFU／mL。结论该方法特异性和灵敏度高，检验周 期短。可用于对食品中多种致病菌的快速诊检和I监控。 关键词：多重PCR；沙门菌；变形杆菌；金黄色葡萄球菌 Establishmentand of PCRfor threefood-bornebacterial SHA multiplex application diagnosing pathogens D括eusePreventionand Dan，LINGXia，XIAO Centerfor Control，Jiangsu yo昭，删Jialin，ZHANGJingping．(Wuxi Wuxi 214023，China) Toestablisha chain forsimultaneousdetection Abstract：Objectivemultiplexpolymerasereaction(PCR)assay ofSalmonella mirabilisand aureus．MethodsThree of havebeen spp．，Proteus Staphylococcus pairspfimem designed tothehiLAofSalmonella Proteusmirabilisand aureusclone according spp．，hemolysin(hpmA)ofSmphy幻coccus pSa一 has 442San3AI andthe PCR were and PCRmethod fragment products580bp，401 multiplex anticipated bp 256bp．A been for Salmonella mirabilisand for