球松素对脂多糖致人脐静脉内皮细胞损伤保护作用及其机制研究.pdfVIP

保护作用及其机制研究 研究生： 杨艳 专 业： 病理学与病理生理学 导 师： 王家富教授 李伟 教授 中文摘要 目的 umbilical endothelial 选择体外培养的人脐静脉内皮细胞(human vascular cell， endothelial 管内皮细胞(vascular 对损伤血管内皮细胞的保护作用，从而探讨蜂胶黄酮类单体球松素抗动脉粥样硬化 (Atherosclerosis，AS)的作用及其机制。 方法 1．消化灌注法培养HUVEC，鉴定后用于实验。 2．脂多糖诱导建立人脐静脉血管内皮细胞损伤模型。 3．倒置显微镜下观察HUVEC的形态变化。 4．MTT比色法观察球松素对HUVEC活性的影响。 immunosorbent linked assay，ELISA)检测细胞上清液 5．酶联免疫吸附法(enzyme 中一氧化氮(nitricoxide，NO)含量。 Transferase mediatedNickEnd Labeling，TUNEL)检测HUVEC凋亡率。 ● ● Oxidase， 7．硫代巴比妥酸(ThibabituricAcid，TBA)法和黄嘌呤氧化酶(Xanthine 。 ．XOD)法测定检测细胞上清液中丙二醛(maleic dimutase，SOD)含量。 酶(superoxide 结果。 ．． 1．HUVEC的形态变化：倒置显微镜动态观察，对照组细胞生长状念良好，细胞 呈梭形，单层铺路石状排列，折光性好。模型组细胞形态不规则，细胞收缩变圆，边 界不清，部分细胞脱落；球松素组及阳性对照组可见细胞间隙变窄，形态趋于正常。 l 势。 3．酶联免疫吸附法检测NO含量：模型组与对照组相比较，NO分泌均明显降 低，具有统计学意义(JpO．05)。球松素各浓度组与模型组相比，NO分泌增强，具 有统计学意义(尸0．05)，球松素作用6h后，随时间延长，NO分泌随有降低的趋势。 4．TUNEL法检测HUVEC凋亡率：TUNEL法示球松素作用时间为1h、3h时， 细胞凋亡率的改变无统计学意义(尸0．05)；其它各时间点模型组与对照组相比较， 率明显低于模型组，具有统计学意义(P0．01)，并呈现出一定的浓度依赖趋势。 5．硫代巴比妥酸法和黄嘌呤氧化酶法测定检测细胞上清液中MDA及SOD含量： 较之对照组，模型组SOD活性明显降低(尸0．05)，具有统计学意义。不同浓度球松 素组与模型组比较SOD活性明显升高(尸O．01)，有统计学意义：结果呈现出一定的 浓度依赖趋势：细胞上清液中的MDA含量无统计学意义。 6．球松素与辛伐他汀联合用药：球松素或辛伐他汀单一药物预处理组与未用药 球松素和辛伐他汀联合预处理组与单一药物预处理组比较，细胞活性增强、NO分泌 增多、细胞凋亡率降低，有统计学意义(Po．01)。各项指标A2水平和B2水平的均数 之差均小于A1水平和