LPS致大鼠发热过程中下丘脑TRPV4对体温及cAMP含量、[Ca2+]i浓度的影响.pdfVIP

在LPS 致大鼠发热过程中下丘脑TRPV4 对体温及 cAMP 含量、［Ca2＋］i 浓度的影响1 王兰兰，王乐，曹宇* 中国医科大学基础医学院生理学教研室,沈阳（110001) E-mail ：caoy5955@ 摘 要：目的探讨TRPV4 在发热时是否参与体温调节过程。方法 用脂多糖复制大鼠发热 模型，结合应用钌红抑制 TRPV4 的活性，观察发热时的下丘脑组织中TRPV4 含量、钙离 子浓度变化与cAMP 含量的关系。结果 单独给予钌红组体温降低，钌红＋LPS 组与LPS 组 相比，△T 、cAMP 与［Ca2 ＋］i 增高幅度均降低，钌红组与钌红＋LPS 组TRPV4 表达明显 低于对照组。 结论 1. TRPV4 通道可能参与正常体温的维持；2. LPS 致大鼠发热可能是通 过激活TRPV4 通道，使钙离子内流增多，进而中枢发热介质cAMP 表达增多，从而引起体 温升高来实现的。 关键词：发热；TRPV4；脂多糖；环磷酸腺苷；［Ca2 ＋］i 近年研究认为，cAMP 是 EP 性发热的主要中枢介质，此外下丘脑中钙离子的浓度变化 在发热中所起的作用也日益受到关注，但具体机制还不清楚。 TRPV4 是瞬时感受器电位香草酸受体家族的成员之一，能被 27 ℃以上的温热刺激激活 [1],是一个非选择性阳离子通道，被激活时可产生一个较大的钙离子内流[2、3] 。研究发现 TRPV4 在下丘脑前部表达较多[4]，这一区域是主要的体温调节中枢，表明 TRPV4 可能在体 温调节中起一定作用。 本实验通过用脂多糖（lipopolysaccharide ，LPS ）复制大鼠发热模型，结合应用钌红 （ruthenium red ，RR ）抑制 TRPV4 的活性，观察发热时下丘脑组织中 TRPV4 含量、钙离 子浓度变化与 cAMP 含量的关系，以探讨 TRPV4 在发热时是否参与体温调节过程。 1.材料与方法 1.1 实验动物与分组 健康♂ SD大鼠,体重200～250 g, 由中国医科大学实验动物中心提供,室温(22 ±2) ℃,昼夜 明暗节律12 h ∶12 h,基础体温(3715 ±110) ℃,单笼饲养, 自由进食水。实验所用试剂均用无热 源生理盐水稀释。 实验前对大鼠进行测温服习7 d 。测量体温时将温度探头插入大鼠直肠6 cm处,待数值稳 定后读数, 以给药前1 h测得的3次直肠温的平均值为大鼠基础体温。实验过程中记录大鼠体温 (0～1 h内每隔15 min, 1～2 h 内每隔30 min, 2～8 h 内每隔60 min测量1次) 。实验结束后检查 插管位置,舍掉位置不正确的数据。 实验分组：将 48 只大鼠随机分成 4 组，每组 12 只。对照组（N ）：向侧脑室注入NS 10 µl，30 min 后经腹腔注射 NS 80 µg/Kg 。钌红组（R ）：方法同N 组，分别注射相同剂量的 RR(Sigma 公司产品）和 NS 。LPS 发热组（L ）：方法同上，分别注射相同剂量的NS 和 LPS 。钌红＋LPS 组（R+L ）：方法同上，分别注射相同剂量的 RR 和 LPS 。 （武汉博士德公司产品） 上述各组中随机选取 6 只动物在腹腔注射生理盐水或 LPS 后 240 min 时断头取材，以备 1 本课题得到国家自然科学基金资助项目（N）；高等学校博士学科点专项科研基金 （No2006159004 ）的资助。 - 1 - 进行各种生化指标的检测。按大鼠脑图谱以灰结节和视交叉的中心点为界定部位，取出下丘 脑组织，一部分立即进行细胞内钙离子浓度测定，一部分立即投入液氮中速冻固定，20 min 后放入－70℃冰箱内待测；另外 6 只动物持续观察 480 min ，并描绘其体温变化曲线。 1.2 侧脑室插管 将大鼠用 10％水合氯醛（3 ml/kg)腹腔麻醉，然后将其头