大肠癌组织miRNA205表达及临床意义分析.pdfVIP

· 1016 · 安徽医科大学学报 ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2014Jul；49(7) 大肠癌组织 miRNA205表达及临床意义分析 陈昌裕 ，余昌俊 ，张 敏 ，谭 胜 ，龙腾云 ，朱正杰 ，欧阳欢 摘要 应用实时定量PCR法检测miRNA205在37对大肠癌 中分化腺癌23例，中一低分化腺癌 11例，低分化腺 组织及远端正常黏膜中的表达，用graphpad软件 t检验分析 癌 1例。病例术前均未行化疗 ，术后病理经病理科 miRNA205在大肠癌中的表达差异及与l临床各病理参数的 医师明确诊断。 关系。与癌旁组织比较，miRNA205在大肠癌组织中明显低 1．2 主要仪器与试剂 一80℃超低温冰箱 (中科 表达，差异有统计学意义，但miRNA205在大肠癌中的表达 美菱)；台式高速冷冻离心机 (美国艾本德Eppendorf 水平与临床各病理参数(性别、年龄、肿瘤浸润深度、细胞分 公司，货号：5810R)；分光光度计(日本岛津公司，货 化 、淋巴结转移)无明显相关性。 号：UV-1240)；实时荧光定量 PCR仪 (美国安捷伦 关键词 大肠癌 ；miRNA205；PCR Stratagene公司，货号：Mx30OOP)；PCR 自动系列化 中图分类号 R735．34 分析仪(中国东胜创新有限公司)；miRNA提取试剂 文献标志码 A 文章编号 1000—1492(2014)07—1016—03 盒(美国Ambion公司)；RevertAidFirstStrandcDNA miRNA是一类 内生的长度约22一nt的小非编码 Synthesiskit(美国Thermofisher公司)；FastStartUni— RNA，直接与靶 mRNA3’非翻译区结合发挥调节作 versalSYBRGreenMaster(Roche公司)；所用引物及 用。人类基因中约60％是miRNA的靶基因。miR． U6引物均购 自华大科技有限公司。 NA在各种各样的生物过程中起着关键的作用，包 1．3 实时定量 PCR方法 括细胞分化、增殖、凋亡、发育、浸润、迁移等。Hogan 1．3．1 组织miNRA提取 取 50～100mg大肠癌 etalL1发现miRNA在大肠癌中存在异常表达，起着 组织及癌旁正常组织，高速匀浆后加入600trlLy— 癌基因或抑癌基因的作用，在大肠癌 的发生、发展、 sis／BindingBuffer，按照说明书提取miRNA，用紫外 分光光度计测定所提取miRNA浓度 。 转移中起着重要作用。该研究通过实时定量 PCR 法检测37对大肠癌组织中miRNA205的表达情况， 1．3．2 逆转录反应 按照逆转录试剂盒操作说明 进行逆转录：冰上加入下列试剂：miRNA的量为 100 分析miRNA205在大肠癌中的表达及其与各病理参 数之间的关系，进一步探讨 miRNA205在大肠癌诊 ng，5×RT Buffer4 ILl，dNTP2 txl，U6 RT Primer1 Ixl，miRNA RTPrimerl Ixl，RTase0．5 l，RNaseIn— 断和治疗 中意义。 hibitor0．5 l，加 DEPC水至2O l。所有试剂加完 1 材料与方法 后 ，置于PCR自动系列化分析仪，反应条件：42ccl