Sf9细胞的培养工艺.pdfVIP

第 19 卷第 3 期 化　工　冶　金 V o l19 N o 3 1998 年 8 月 En g in eer in g Ch em ist ry M eta llu rgy A ug 1998 ·研究简报 · Sf 9 细胞的培养工艺 王晓迟　　戚艺华　　欧阳藩 ( 中国科学院化工冶金研究所生化工程国家重点实验室　北京　100080) 摘　要　对 Sf9 细胞的静止培养工艺进行了研究. 首先对 Sf9 细胞进行环境pH 值由低到高的 驯化, 发现该细胞对于pH 值变化的适应能力十分有限, 在初始pH 值为 7 0 的培养液中即不能 生长, 而且在细胞生长过程中培养液的pH 值会略有升高. 其次进行了培养液血清浓度由高到低 的驯化, 结果表明该细胞对于低血清环境的适应性很强, 培养液的血清浓度降至 2 时细胞仍可 生长. 最后, 研究了初始接种密度对 9 细胞生长的影响, 发现在其传代过程中, 104 个 数 Sf m l 量级是其生长的临界接种密度. 关键词　 9 细胞, 培养工艺, 值, 血清浓度, 接种密度 Sf pH 中图分类号　 28 Q 1　前　言 80 年代以来, Sf9 昆虫细胞—杆状病毒系统被广泛用于各种重组蛋白的表达. 该细胞有许 多优点, 如非贴壁依赖性、培养温度低、可在无血清体系中繁殖等, 很适合高密度、大规模 培养. 与之相关的各种发酵设备也在不断被开发. 对Sf9 细胞的研究既能为动物细胞大规模培 养找到一个新的对象, 又可使推广多种以该细胞为表达系统的基因工程产品成为可能. 要利 用这株细胞, 首先要对其培养工艺有全面、深入的了解, 然而 目前Sf9 细胞培养工艺方面的 研 究成果大部分属于商业机密, 文献报道很少. 本文从静止培养入手, 对几项关键性的工艺条 件进行了研究. 2　材料和方法 2 1　细胞系 ( ) Sf9 昆虫细胞, 来自美国A T CC 160～ 220 代 . 2 2　细胞培养液 2 2 1　pH 梯度实验培养液 用二次蒸馏水溶解 4 1 昆虫细胞培养基干粉 ( , . ) , 加 035 , 用 IPL G IBCO In c g LN aH CO 3 2 5 调 至设定值, 以022 滤膜过滤除菌, 向滤后液中加入 2 胰蛋白肉汤 m o l LN aO H pH m ( , . ) , 1 制霉菌素, 50 单位 庆大霉素以及 10 的热灭活小牛血清. G IBCO In c m l 2 2 2　血清梯度实验培养液 先将有血清培养液的pH 调至 62, 然后加入设定浓度的热灭活血清, 除血清条件外其余 同上; 无血清培养液 900 ( , . ) 中加入 2 胰蛋白肉汤. Sf II SFM G IBCO In c 收稿 日期: 修回日期: 19971016