牛流行热病毒G1抗原表位基因在大肠杆菌中的表达、纯化及抗原性鉴定.pdfVIP

卷 期 ! # 微 生 物 学 报 !（）： # !’( ) *%$ 年 月 日 $%% ! !#$ %’()(*(+$ ,-$ ! +,-. $%% !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 牛流行热病毒 抗原表位基因在大肠杆菌中 ! 的表达、纯化及抗原性鉴定 郑福英，蔺国珍，邱昌庆 （中国农业科学院兰州兽医研究所 家畜疫病病原生物学国家重点实验室 农业部畜禽病毒学重点开放实验室 兰州 #%%! ） 摘 要：从包含牛流行热病毒 蛋白基因的质粒 中克隆 抗原表位区基因，与表达载体 连接， C DEF4C C1 DC5G4!241 成功构建重组质粒 。重组质粒转化 （ ），以 进行诱导，并确定了最佳表达条件的 浓度为 DC5G4C1 /H$1 F5# IJ2C IJ2C 、反应温度为 、诱导时间为 。可溶性表达的目的蛋白经 !/ 介质纯化，纯度 % K 166=3L H 1M 1(N C3,O7ON8=-. P.DN7Q=B. 2E 达 ；以包涵体形式存在的重组蛋白以 的脱氧胆酸钠洗涤、 的 十二烷基肌氨酸钠溶解、透析复性、 (% R $ R % K* R S4 !/ 纯化后，纯度达 以上。 试验表明纯化的目的蛋白有良好的反应原性。经 C3,O7ON8=-. P.DN7Q=B. 2E (* R T.BO.Q- U3=O 间接 检测，测得牛流行热病毒 份阳性血清的 值平均为 ， 份阴性血清的 值平均 5HIP0 1$ !!’% 1K(1# V % K$#1 1$ !!’% 为 ，差异极显著（ ）。将重组蛋白作为抗原免疫兔子，试验兔均产生了高滴度的抗体，证实该蛋 % K#*’ V % K%#$ # W % K%1 白有免疫原性。将目的蛋白作为包被抗原，测得( 份狂犬病病毒阳性血清的 !!’% 值平均为% K#$! V % K%#1，与所测 1$ 份阴性血清的!!’% 值接近，说明不存在交叉反应。以上结果均证实纯化后的重组蛋白有良好的生物学活性和 特异性，可作为包被抗原，开发5HIP0 试剂盒。 关键词：牛流行热病毒； 抗原表位基因；大肠杆菌；表达；鉴定 C1 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） P(*$ K* 0 %%%14$%’ $%% %#4%!’(4%* 牛流行热（ ）是由牛流行热病毒（ ）引起 研究所原