球孢白僵菌羧基转运蛋白基因BbJEN1及其上游序列的克隆与分析.pdfVIP

卷 期 !! 微 生 物 学 报 $% ’!! ,% ’ 年 月 ##! ! !#$ %’()(*(+$ ,-$ ()*+ ##! !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 球孢白僵菌羧基转运蛋白基因.)/01 ! 及其上游序列的克隆与分析 张永军 方卫国 肖月华 金 凯 裴 炎 （农业部生物技术与作物品质改良重点实验室 西南农业大学生物技术研究中心 重庆 !##C1. ） 摘 要：在分析一株球孢白僵菌24J,( 插入突变体21 的26HH+;H 序列的基础上，根据与其具有高度同源性的一条 金龟子绿僵菌8K2 序列（编号为(LC/.）设计简并引物，用M(J8 法从球孢白僵菌中扩增出该8K2 的同源序列及 其延伸序列。序列分析表明，该片段与粗糙脉孢霉的羧基转运蛋白L8,1 具有高度同源性，由此确定该序列为球孢 白僵菌羧基转运蛋白L8,1 基因的部分序列。然后利用M(J8 法延伸扩增该序列的上、下游序列，获得球孢白僵菌 羧基转运蛋白L8,1 的全长J,( 序列，命名为 !#$% 1。利用/N4O(P8 扩增出球孢白僵菌羧基转运蛋白L8,1 的 序列，命名为 。 全长 ，编码 个氨基酸的蛋白。推测蛋白分子量为 ，等电 AJ,( #$% 1 #$% 1 1.0.Q) 01! 00BC0 ’ /CJ6 点 。氨基酸序列与金龟子绿僵菌、粗糙脉孢霉和酿酒酵母羧基转运蛋白 的同源性分别为 、 和 B ’ / L8,1 CC R .. R 。序列分析表明， 含有 个内含子。 杂交表明， 基因在球孢白僵菌基因组中为单拷 /# R !#$% 1 K%?SG3*; !#$% 1 贝。利用O24TPO 法对 #$% 1 的表达特性进行了分析，结果发现 #$% 1 基因的转录受蟑螂壳、蝉蜕等昆虫体壁 的诱导，受葡萄糖的抑制。进一步利用M(J8 法获得了长为BCCQ) 的!#$% 1 上游序列，其中含有可能的葡萄糖抑 制调控序列和压力反应元件。 关键词：球孢白僵菌，羧基转运蛋白 中图分类号： 文献标识码： 文章编号 （ ） UC-0 ( ###14.#B ##! #4#1B-4#! 利用遗传转化随机插入J,( 获得突变体，是研 10 中克隆编码羧基转运蛋白L8,1 基因及其上游序 ［］ 究病原真菌侵染致病机理的重要手段之一1 。我们 列并进行分析，为进一步研究L8,1 在球孢白僵菌中 曾通过遗传转化从昆虫病原真菌球孢 白僵菌 的功能及其与21 表型变化的关系奠定基础。 （ ）中获得了一株表型变化明显的 （ ）法 ’()*’+,( #(--,(.( M(J8 M4=G6)3@ (@6)S%* J3)3;@6;S 87S3;=+%; 插入突变体 ，该突变体菌落生长速度与 是一种依靠“ ”形接头延伸未知序列的