铜绿假单胞菌临床分离株耐药性及质粒分析.pdfVIP

药 物 生 物 技 术 PharmaceuticalBiotechnology 2014，21(4)：317～320 3l7 铜绿假单胞菌临床分离株耐药性及质粒分析 庄禧懿 ，王华富 ，朱 卫 ，李明皓 ，储卫华h，胡加亮 (1．中国药科大学 生命科学与技术学院微生物学系，江苏 南京 210009；2．浙江丽水人民医院 临床药学科 ，浙江 丽水 323000；3．中国药科大学 理学院物理化学系，江苏 南京 210009) 摘 要 对从临床分离的铜绿假单胞菌进行耐药性分析及质粒分析 ，为临床合理使用抗生素提供依据。对 临床收集的56株铜绿假单胞菌，通过K-B纸片扩散法进行耐药性测定；并通过碘淀粉法和酸法测定B．内酰胺酶； 提取质粒进行琼脂糖电泳鉴定。临床分离株对头孢西丁、头孢呋辛、呋喃妥因、利福平、万古霉素等的耐药性达到 了100％，对卡那霉素、红霉素、磺胺甲嗯唑／甲氧苄啶、复方新诺明、头孢噻肟、头孢哌酮、阿奇霉素、头孢曲松、哌 拉西林等抗生素耐药性介于62．5％～96．4％之间，环丙沙星、头孢哌酮／舒 巴坦、美罗培南耐药性较低介于21．4％ ～ 25％之间，铜绿假单胞菌对多黏菌素耐药性最低，仅为 1．8％；通过碘淀粉法和酸法，56株中有37株 B．内酰胺 酶阳性菌株 ，占总菌株的66％；质粒鉴定结果显示 ，所有菌株均含有 1个大约为20kb的质粒。铜绿假单胞菌临床 分离株具有较广的耐药谱 ，且多数能产 B-内酰胺酶 ；所有菌株都含 1个20kb的大型质粒 ，可能与其耐药性相关， 提示消除质粒可能降低其耐药性。 关键词 铜绿假单胞菌；耐药性；3-内酰胺酶；质粒；碘淀粉法；酸法 中图分类号 Q939．112 文献标志码 A 文章编号 1005．8915(2014)04．031704 铜绿假单胞菌 (Pseudomonasaeruginosa，PA)是医院临 1．2 培养基与试剂 床感染最常见的条件致病菌，主要引起术后伤 口感染、褥 MH培养基 北京奥博星生物技术公司；抗生素药敏 疮、脓肿、化脓性中耳炎等疾病。免疫力低下的患者是易感 纸片25种：阿米卡星、头孢他啶、头孢曲松、磺胺甲嗯4／甲 人群，容易出现在呼吸内科、烧伤科和 ICU1【1。铜绿假单胞 氧苄啶(SXT／TMP)、环丙沙星、头孢噻肟、头孢西丁均购 自 菌具有耐药性强、抗菌谱广、感染后难 以治愈等特点，临床 英国的Oxoid；万古霉素、红霉素、头孢哌酮、利福平、复方新 上常常采用多种抗生素联合使用的治疗方法。由于抗生素 诺明、妥布霉素、呋喃妥因、头孢呋辛、庆大霉素、链霉素、阿 的不合理使用，铜绿假单胞菌的耐药性问题越来越严重，临 奇霉素、卡那霉素、哌拉西林 、哌拉西 他唑巴坦、头孢哌 床治疗越来越困难。铜绿假单胞菌的耐药机制 比较复杂， 酮／舒巴坦、多黏菌素B、美罗培南、氨曲南均购 自杭州天和 分为外膜通透性的改变、外膜蛋白OprD2的缺失、对药物的 微生物试剂有 限公 司；质粒试剂盒：购 自美 国爱思进 主动外排系统、能产生多种 B一内酰胺酶以及氨基糖苷类钝 (Axygen)试剂盒 AP—MN—P-250。 化酶、抗菌药物靶位的改变、形成生物被膜等 ，其中比较 1．3 主要仪器和设备 重要的一种机制就在于其质粒介导的B-内酰胺酶。为了指 ThermoD一37520台式高速冷冻离心机、上海智诚 ZH— 导临床合理使用抗生素，对浙江某医院56株铜绿假单胞菌 WY-211B台式摇床、Thermo702超低温冰箱、电泳仪、TOMY 临床分离株进行产 B一内酰胺酶的比例及其相关耐药性情 SX-500灭菌锅、上海博迅 GSP-9080培养箱、苏净安泰VS一 况的研究 ，并对分离菌株的质粒进行了初步研究。 1300L—U无菌超净台、BIO．RADUniversalHoodII大型凝胶 成像仪。 1 材料