灰树花海藻糖合成酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达.pdfVIP

卷 期 !! ! 微 生 物 学 报 %’ (!! . (! 年 月 ##! $ !#$ %’()(*(+$ ,-$ )*+*,- ##! !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 灰树花海藻糖合成酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达 徐志祥 李 刚 王震宇 李宝健 （中山大学生命科学院基因工程国家教育部重点实验室 广州 6/#76） 摘 要：海藻糖主要作用是作为生物体的结构组分、以及保护生物膜和保护蛋白质。在灰树花中，海藻糖在干重中所 占比例最高可达到/6H I /7H ，说明灰树花合成海藻糖的能力很强。将灰树花海藻糖合成酶基因克隆，并在大肠杆 菌表达系统里表达。表达量为/8#:+J K。通过活性测定，证明在大肠杆菌中表达的海藻糖合成酶具有酶活性，结合基 因工程和酶工程方法，为合成海藻糖的研究提供了新的方向。 关键词：灰树花，海藻糖合成酶基因，蛋白表达 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） L858 G82 ) ###/02#8 ##! #!0#6!#0#5 灰树花（ ）又称贝叶多孔菌、千佛菌、栗子 量标准购自 公司， 、 购自 !#$ %’ $ %()%*’ 3;V;R; 3! Q.) K+;,4 )+;;,4 .4W 9C0 蘑、麻栗窝菌、重菇、叶状奇果菌、莲花菌等，在日本俗称舞茸。 +’;CB N’;=。其他试剂为国产或者进口分析纯试剂。大肠杆 它隶属于真菌门（ ）、担子菌亚门（ ）、非 菌蔗糖磷酸化酶由本室通过大肠杆菌表达后纯化获得。 9*:M?-; N;,B:M?-C; 褶菌目（ ）、多孔菌科（ ）、多孔菌属 灰树花菌丝体总 提取 )OFM’’OF;’4, P’MO;?4;4 !# $% ［］ （ / +%,-%.* ） 。 参照文献［］的方法进行。 6 海藻糖（ ）是一种稳定的非还原性双糖，由两个吡 34F;’,4 !’ $()*+$ ［］ ［］ ! 喃环葡萄糖分子以 ，糖苷键连结而成 。它的主要作用是 根据 等 报道的序列设计了一对引物，引物 ： / / X,FB; / 6Y0 作为生物体的结构组分、以及保护生物膜和保护蛋白质。海 SSZ))33S)3ZZS3SS3SSSS)SS)Z 05Y；引物 ：