草鱼免疫应答的初步研究98962.pdfVIP

维普资讯 第 l5卷 第 耳期 水 生 生 物 学 报 Vo1．1，．No．● 1991年 12月 ACTA HYDROBIOLOGICA SlNICA Dec．， 199I 草鱼免疫应答的初步研究 江育林 李 燕 于 平 (中国科学院水生生物研究所，武汉 430072) 提 要 研究了草鱼在不同水温条件下受抗原刺激后其中和抗体的变化。15℃培养条件下中和抗 体上升缓慢，9周内滴度低于 1：8；20屯 时，3周后抗体可上升到 1：256，最高远 1：5ZT0，而在 25屯时，1周中和抗体即达到 1：570，最高可达 1：2000O以上。 并探索了从草鱼血清中提纯 抗体的条件，研究其抗体的特性 。草鱼血清中的抗体为大分子蛋 白，容易解离为抗原性相同， 分子量近似于人 IgG 的较小分子，含有较多的二硫键 ，具有类似 IgM 的某些特性。 关键词 草鱼免疫应答，体液免疫，草鱼抗体，草鱼 IgM 有关鱼类对抗原的免疫应答知识是人们将免疫技术用于鱼病诊断，预防和治疗的基 础。Anderson等人 曾在 《鱼类免疫学》一书中提及各种鱼的免疫反应情况∞，但关于草鱼 免疫的描述则尚缺如。草鱼与其它鲤科鱼类相比对各种病原体特别易感，因此有必要对 它 的免疫应答情况进行研究。 在研究过程中，我们用传染性胰脏坏死病病毒的He株 (IPN—He)作为抗原免疫草 鱼。这是因为 (IIPN 病毒对鲤科鱼类不致病，对草鱼而言它只是一种抗原而不是病 原。从而排除了病理因素的干扰。(2)IPN 病毒是台双链 RNA 的二十厩体病毒，与引 起草鱼出血病的草鱼呼肠孤病毒 (GCRV)十分相似。故两者的免疫反应比较，可能会使 本研究更具有实际意义。 (3)作者实验室内已有十分成熟的方法可将抗 IPN 的中和抗 体灵敏 ，准确地检测 出来 。 由于免疫应答是一个复杂的过程，它与草鱼的机体本身及环境因素都有关系。我们 将分别在男文中予以探讨。本文主要讨论两个问题：(1)草鱼在有抗原刺激的情况下，有 无抗体产生，以及抗体的产生与温度的关系；(2)抗体的部分特性。 材 料 与 方 法 抗原制备 将 IPN—He病毒株接种到新鲜的PG 细胞单层 ，于 20~C培养直至纽 胞病变完全 。收集细胞悬浈并冻融 2次后，3，000r／rain离心 20rain去掉细胞碎片，然后 85000r／rain离心 4h沉淀病毒。 沉淀用少量 PBS悬液过夜 ，测定其病毒含量并稀释到 本文 中电泳扫描照片由中国科学院水生生物研究所朱兰菲老师协助铷作，特此致谢。 1989年 1月 ●日收到。 维普资讯 水 生 生 物 学 报 lO TCID ／o．5ml，经 0l弗 甲醛 37℃ 灭活 3d后 ，作为注射草鱼的抗原 ，保存于 一20℃ 备用。 接种抗原 20条二龄草鱼(平均重约 300g)喂养在 自来水中，其中 15条为试验组，每 条注射 05ml的上述抗原悬液 ，剩下 5条为对照组。 接 种前每条鱼抽 0．5ml血 ，注射抗原后每周也抽血 1次以收集血清 。每组鱼的血清 混台在一起 ，经 56℃ 30min灭活后 ，用中和试验测定其血清 中的抗体水平 。 该试验共进行 3次 ，草鱼接种抗原后分别在 l5℃，20℃ 和 25℃ 三种不 同水温 中饲 养 ，以测定草鱼在不 同水温 中的抗体产生情况。 中和试验 用 PG细胞在 96孔板 中测定。将经灭活 的鱼血清按 1：2系列稀释。 100 l血清与 100t~l含 200TCID 的 IPN—He病毒悬液混匀后于 20℃ 保温 b【以充分 中和 病毒，然后接种到新鲜的PG细胞中，每血清稀释度接 3孔 ，每孔 50 ，并设立对照。20℃ 培养 7d后观