基因芯片法检测乙肝病毒多位点变异的临床应用.pdfVIP

第27卷第 6期 实 验 与 检 验 医 学 2009年 12月 EXPERIMENTAL AND LAB0RATORY MEDICINE · 实验研究 · 基因芯片法检测乙肝病毒多位点变异的临床应用 李金明，谢 南，熊德琴，鲁纯腾 (南 昌市第九医院，江西南昌 330003) 摘 要 ：目的 应用基因芯片技术检测临床乙肝患者血清中的乙型肝炎病毒(HBV)kl关的耐药位点．评测该方法在监测HBV耐 药中的作用 方法 在 258例使用不同核苷类药物的乙肝患者血清中．采用寡核苷酸探针芯片检测其携带的HBV相关耐药基 因变异情况 ，并结合 DNA序列分析进行 比较 。结果 在 160例使用拉米呋啶组血清中检测到拉米呋啶耐药 30％(48／1601，替比 呋啶耐药 8．75％(14／160)，恩替卡韦耐药 0．6％(1／1601．98例使用阿德福韦组检测到阿德福韦耐药 12．2％(12／98)它和基因测序法 比较 ，符合率 100％。 结论 基因芯片法可 同时检测针对拉米呋啶、阿德福韦 、恩替卡韦、替比呋啶的多重耐药基 因位点，是一 种可靠 的检测方法 ．可为临床确立 HBV患者治疗方案提供重要参考 关键词 ：基因芯片：乙型肝炎病毒：耐药 中图分类号R512．6+2．Q343．1+7。R373．2+l 文献标识码A 文章编号 1674—1129(2009)06—0615—02 doi：10．3969／i．issn．1674—1129．2009．06．0l3 我 国是 乙型肝炎病毒fHBV)感染 的高发区．而 1．2 方法 采用宁波瑞芯生物科技有 限公司生产 抗 乙肝病毒治疗在 国内外尚无特效药物 ．只有抑制 的基 因芯 片试 剂 ．可 同时 检测 HBV rtI169T、 慢 乙肝病毒复制 的部份有效药 国内外公认 的抗 rtV173L、rtL180M、rtA181T／V、rtT184S／A／I、rtS202I／ HBV核苷类药物主要有拉米呋啶、阿德福韦、恩替 G、rtM204V／I、rtN236T、rtM250V等位点的变异。 卡韦、替 比呋啶等。近来 的研究表明，HBV在人体内 1．2．1基因芯片设计 将 HBV不同耐药检测探针 受 自然压力 、人体免疫力和药物治疗的影响，基 因序 分别点在排成一行 的三个点上 ．芯片左边为突变探 列突变的HBV病毒株会不断的大量积累 ．而有些病 针 区，右边为野生探针区．最右边两行为质控探针 ， 毒 的基因变异恰好位于 HBVDNA聚合酶的区域 ． 中间一行为阳性对照探针 就会产生耐药 1_【 目前对于 HBV多重耐药主要依赖 1．2．2PCR扩增 按常规方法抽提 HBVDNA．取 DNA序列分析 ．费时费力价格 昂贵 ．本论文 旨在评 1．5txl的DNA模板于 PCR反应液 t中扩增 ．再取 估基因芯片在 HBV耐药检测中的临床价值和应用 0．51xl的扩增产物 于 PCR反应液 2中扩增 。于 吲前景№姗。 ABI2700扩增仪进行 以下循环 ：94℃4min预变性 ， 6 9 1材料与方法 94℃30s56oC30s72oC30s运行 35次循环 ．最后 72℃ 1．1对象 南昌肝病 医院门诊和住院部 2008年 3 延伸4min 月到 2009年 8月 ．258例使用不 同药物 的 HBV— 1．2．3 芯片杂交 、显色与结果分析 取 21xl扩增产 DNA阳性患者 ．其 中 160例患者持续使用拉米呋啶 物 、10txl的杂交液混匀置于 100℃中变性 5min，迅 48周以上 ．98例患者使用阿德福韦48周以上 ．其中 速冰浴 5