转染DLC1基因对人卵巢癌OVCAR-3细胞增殖和迁移能力的影响.pdfVIP

摘 要 转染DLCl基因对人卵巢癌OVCAR．3细胞 增殖和迁移能力的影响 硕士研究生张海玲 导 师史惠蓉教授 郑州大学第一附属医院妇产科 河南 郑州450052 摘 要 背景和目的’ 卵巢癌作为妇科三大恶性肿瘤之一，其死亡率远远超出宫颈癌和子宫内膜 癌，位居妇科恶性肿瘤之首。其具有起病隐匿，病程短，易早期侵袭、转移等 特点，目前虽应用手术、化疗等治疗方法，但其长期生存率却无明显改善。因 此寻找有效的抑制卵巢癌发生发展的基因治疗靶点成为其研究的热点。肝癌缺 inliver 失基因-l(deleted 多种肿瘤中通过杂合性缺失和(或)启动子甲基化而低表达或不表达。DLCI蛋白 为Rho GTPase GTP酶活化蛋tt(Rho activatiogprotein，RhoGAP)，主要通过其 Rho 癌中通过调控核转录因子AP．1的表达，参与卵巢癌的发生与发展。目前关于 少。 该研究采用脂质体介导的基因转染技术，将重组质粒pEGFP．C3．DLCI和空 观察 质粒pEGFP-C3分别转染不表达DLCl基因的人卵巢癌细胞OVCAR．3， DLCl基因对卵巢癌细胞增殖、细胞周期和迁移能力的影响及其相关分子机制， 初步探讨其在卵巢癌发生发展中的作用，及其作为卵巢癌基因治疗靶点的意义。 摘要 方法 1提纯重组质粒pEGFP—C3．DLCl，双酶切鉴定质粒的正确性。采用脂质体介 组。G418筛选单克隆后，采用RT-PCR及Western blotting方法检测转染前后 三组细胞DLClmIⅢA和蛋白的表达情况，观察转染效果； 后三组OVCAR．3细胞增殖、细胞周期和迁移能力的变化，分析DLCl基因 对OVCAR．3细胞增殖和迁移能力的影响； 3采用Western 白及其磷酸化水平的变化，分析DLCl基因发挥作用的分子机制； 4应用SPSSl6．0软件进行统计学分析，计量资料多组间均数差异性比较采用单 因素方差分析(one．way 行Pearson相关性分析。以双侧a=0．05为检验水准。 结果 l 和DLCl蛋白表达，转染DLCl基因后可检测到DLClmRNA和DLCl蛋白 的稳定表达。 义。 4-0．73)％、 DLCl细胞的细胞周期Go／GI期、S期、G2／M期的比例分别为(55．06 例显著降低。 摘要 4 组细胞的迁移细胞数显著少于两对照组。 5 OVCAR．3．DLC p-JNK(Thrl83／Tyrl 义。但FAK、JNK蛋白的表达水平无明显变化(尸0．05)，差异无统计学意义。 结论 以一 l DLCl基因可部分通过Gl／S检验点起阻滞作用，从而抑制卵巢癌细胞的体外 增殖能力。 2 DLCl基因可抑制卵巢癌细胞体外迁移能力。 ～，一 蛋白脱磷酸化，抑制卵巢癌细胞体外增殖和迁移能力，其可能通过其他信号 通路参与细胞周期进展。 关键词卵巢肿瘤肝癌缺失基因l 细胞增殖细胞迁移转染 111 Abstrac