培养基及其制备1.pptVIP

培养基及其制备 培养基的营养成分及其功能 1.碳源(Carbon source)【糖类、脂肪、有机酸】：能源物质，构成菌体和代谢产物 2.氮源(Nitrogen source)【无机氮源：氨水、硫酸铵、尿素、硝酸钠；有机氮源：豆饼粉、麦麸、玉米浆、蛋白胨；发酵菌丝体、酒糟】：构成菌体和代谢产物，硝化细菌的能源物质 3.无机盐类(Mineral nutrition)【 P、Mg、S、Fe、K、Na、Pb、Cl、Zn、Co、Mn等】：维持酶活力，调节渗透压、pH值、电位等 4.特殊生长因子【生物素、硫胺素、肌醇等】：构成辅酶的组成部分，促进生命活动 5.水：溶解营养物质和代谢产物 培养基的配置原则 根据不同微生物的需要配置不同的培养基 何菌种？何产物？是固态还是液态？是种子还是发酵培养基？ 各种营养物质的浓度与配比，特别是C/N 将培养基的pH控制在一定范围内 考虑利用价廉且易于获得的原料 废代好、粗代精、野代家、 烃代粮、纤代糖、国代进、简代繁 培养基的类型 培养基的类型 分类依据 类型 营养物质来源 天然、合成、半合成 培养基物理状态 液体、固体、半固体 培养基的成分和目的 基本、完全、鉴别、选择 生产工艺的要求 孢子(Spore)、种子、发酵 培养基的用途：筛选菌种、保藏菌种、检验杂菌、培养种子、发酵生产等 按培养基物理状态分类 液体培养基：呈液体状态的培养基，用于：大规模工业生产；实验室摇瓶试验；微生物生理代谢研究。 固体培养基：液体培养基中加入适量凝固剂，用于菌种培养、分离、保存，育种。如：斜面、平板。 半固体培养基：介于固态和液态之间（加0.5%左右 琼脂）的培养基。 用于菌种鉴定、细菌运动性观察和噬菌体效价测定；厌氧菌培养、保藏。 按培养基的成分和目的分类 1、 选择性培养基 ：就是根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基。 其功能是从混合菌样本中的选取优势菌，从而提高该菌的筛选效率。 1)加富性选择培养基： 　　 用作加富的营养物主要是一些特殊的碳源或氮源，如甘露醇、纤维素、石蜡油、糖液等。 　2)抑制性选择培养基： 　　 选择性抑制剂有染料、抗生素、脱氧胆酸钠、叠氮化钠等。 　　 用于选择性的其他理化因素还有温度、氧、pH和渗透压等。 营养肉汤培养基的配置 牛肉膏 0.5g 蛋白胨 1 g 氯化钠 0.5g 蒸馏水 100ml pH 7.2~7.6 每组配培养基的量（8人） 调pH、高压灭菌 用1mol/L的NaOH调pH至7.2~7.6 分装：固体、半固体、液体，3ml/管 高压蒸汽灭菌121℃ 15~30min * * * * 固体培养基：液体培养基加入琼脂粉（2g/100ml） 半固体培养基：液体培养基加入琼脂粉（0.4g/100ml） 固体培养基 250ml 半固体培养基 25ml 液体培养基 25ml 碳源、氮源均有速效与迟效之分：如葡萄糖、氨水是速效的，而脂肪、蛋白质则较难被利用，但注意生产中并非速效就好，如青霉素生产中如葡萄藤浓度过高会导致细菌代谢过于旺盛，产生大量有机酸，使PH下降，而产青霉素菌在较低PH值下的产青霉素能力会大幅度下降。 通常的策略是在种子扩大时期采用速效营养源，而在主发酵时期采用迟效营养源，控制代谢方向，延长有效生产时期。 １、考虑菌种的生长、生理习性，适于生长和积累代谢产物，适于控制和提取，考虑补料的问题； ２、不同微生物 的Ｃ／Ｎ比要求是不同的，氨基酸发酵时就要求比较低的碳氮比（5-6），而通常发酵（如青霉素）较高为50-500，； ３、ＰＨ适当（ＰＨ控制代谢方向）且稳定（发酵工程中变化较小）； ４、尽量充分的利用原料，关键在于抓高产和稳定，严格控制原料转化率，有可能的话考虑原料替代。 ５、摸索培养基的基本方法：根据菌种习性在已有培养基的基础上小试—小型发酵罐中试（遵循先改变单个的条件，再进行复合条件试验的原则）。 详细解释鉴别培养基与选择培养基 筛选培养基：如选择（鉴别）培养基 保藏培养基：基本培养基 检验杂菌：加富培养基 * * 碳源、氮源均有速效与迟效之分：如葡萄糖、氨水是速效的，而脂肪、蛋白质则较难被利用，但注意生产中并非速效就好，如青霉素生产中如葡萄藤浓度过高会导致细菌代谢过于旺盛，产生大量有机酸，使PH下降，而产青霉素菌在较低PH值下的产青霉素能力会大幅度下降。 通常的策略是在种子扩大时期采用速效