流感病毒非结构蛋白对TBK一1的抑制作用.pdfVIP

维普资讯 微生 杂志2005年5月第 25卷第 5 』 1 ! 塑 丛盟垫 ： 垄 ： · 363 · 病 毒 学 ． 流感病毒非结构蛋 白对 TBK一1的抑制作用 周 国平 陈吉庆 吴升华 陈晓禹 陈辉 【摘要 】 目的 流感病毒非结构蛋白1(nonstmcturalprotein1，NS1)抑制干扰素调节因子(inter— femnregulatoryfactors，IRF)3的机制未明，TANK结合激酶 1(TANK—bindingkinase1，TBK一1)能使 IRF-3 活化，研究 NS1是否对TBK-1有抑制作用。方法 亚克隆IRF-3、NS1和TBK-1至 peDNA3．1-flag构建 flag-lRF-3、flag-NS1和 flag-TBK一1质粒 ；用 1]3K-1对 TBK-1+NS1以及 IRF-3+TBK-1对 IRF-3+TBK-1+ NS1两组实验，分别共转染人胚胎肾上皮293细胞，用抗 flag抗体作Westernblot分析，鉴定 1RF-3、NS1 和TBK-1的表达，观测NSI对TBK一1活化 IRF-3的抑制作用；荧光素酶功能分析方法观测 NS1对 TBK- 1诱导的干扰素p(I 一p)启动子一pGI，2B荧光素酶活性的影响。结果 IRF-3、NS1和TBK-1均有高表 达。TBK-1能使 IRF-3活化，Westernblot分析显示：TBK-1转染的细胞出现迁移较慢的 IRF-3Ill和Ⅳ型， NS1共转染可使 IRF-3Ill和Ⅳ型几乎消失；荧光素酶功能分析显示 ，NS1能抑制 TBK-1活化 内源性 IRF-3所诱导的 IFN．p启动子活性 ，约为对照组的 1，4，TBK-1+IRF一3共转染可使 IFN一8启动子活性增 高近 1000倍，NS1可使TBK-1活化外源性 IRF一3所诱导的1FN一8启动子的活性降至对照组的约 1，2至 1／3。结论 流感病毒NS1可抑制TBK-1所致的IRF一3活化，功能分析提供了NS1显著抑制TBK-1诱导 的IFN—p启动子活性的证据，首次阐明了流感病毒NS1抑制 IRF-3因而抑制干扰素p产生的机制之一 是通过TBK-I信号通路所取得，为新的抗病毒治疗及新药开发战略提供了基础。 【关键词 】 干扰素调节因子3(IRF-3)；TANK结合激酶 1(TBK-1)；非结构蛋白1(NS1) inhibitoryfll~ on ofinfluenzanonstruauralprotein 1toTBK-1 ZHoU Guo-ping，(；HEN qing WUSheng-h~a，CHE Xiao-yu，CHENHui．DepartmentofPediatrics，tk First 跑dHospita1．Nanjing MedicalUnivers’，，Na@ng21∞29．China G)， oJl aHthor：ZHOU Guo-ping，Email：gpzhou2003@ yahoo．corn． cn 【Abstract】 Objective ToexplorewhetherNSIisabletoinhibittheactivityofTBK一1．Methods IR 3，NS1andTBK-1were subclonedintopeDNA3．1-flag respectively．1]3K-1vsTBK-1+NS1were transfectedinto HEK293cells．CeUextractswereanalysedbyWestem blotnadthenprobedwithmonoclonalflag antibodv．Lucif- eraseassaywascarriedoutbyco-transfectionofreporterplasmid，interferon-ppromoter-pGL-2B，withtwogroups ofcDNA expressionplasmids：TBK-1vsTBK-