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第一章 基因克隆
1. 操作流程 1
2. 方法 1
2.1 设计引物 1
2.2 PCR 1
2.3 割胶回收目的片段 2
2.4 连接 3
2.5 感受态细胞制备及转化 3
2.6 接菌 4
2.7 阳性克隆鉴定 5
2.8 质粒抽提 5
2.9 测序 6
3. 基因克隆的编码 6
第二章 酵母双杂交筛选
1. 操作流程 7
2. 方法 7
2.1 诱饵基因转化筛库宿主菌 Y190 7
2.2 含 Bait 基因质粒的 Y190 保种 8
2.3 Bait 基因的自激活检测 9
2.4 诱饵基因筛库 10
2.5 抽提酵母质粒 13
2.6 酵母质粒的扩增 14
2.7 Prey 质粒与 Bait 质粒共转Y190 16
第三章 细胞培养和转染
1. 细胞培养 17
2. 细胞转染 17
2.1 脂质体介导的贴壁细胞转染法 17
2.2 磷酸钙介导的贴壁细胞转染法 18
3. 相关试剂 19
第四章 免疫共沉淀
1. 操作流程 20
2. 方法 20
2.1 收获细胞 20
2.2 Protein G beads 悬液的制备 20
2.3 Preclear 21
2.4 免疫共沉淀 21
3.试剂 22
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第五章 Western Blot
1. 操作流程 23
2. 方法 23
2.1 电泳 23
2.2 转膜 23
2.3 杂交 24
2.4 显色 24
2.5 膜的 strip 24
3. 试剂 25
第六章 报告基因检测系统
1. NF-kB 报告基因检测系统 26
1.1 细胞培养 26
1.2 转染 27
1.3 细胞收获及处理 28
1.4 luciferase 分析 28
1.5 Western-blot 检测待检基因的表达情况 28
2. p53报告基因检测系统 29
2.1 细胞培养及铺板 29
2.2 转染 29
2.3 细胞收获及处理 30
2.4 luciferase 分析 30
2.5 Western-blot检测待检基因的表达情况 31
3. NFAT报告基因检测系统 31
3.1 细胞培养 31
3.2 电击转化 31
3.3 铺板加药 32
3.4 细胞收获及处理
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