胸腺素α-%2c1-和抗SARS八肽化学合成与分离纯化.pdfVIP

摘要 本文系统研究了不同缩合剂对固相化学合成胸腺素旺l的影响，并对其合成 工艺和分离纯化工艺进行优化。最佳的合成工艺为：以HBTU为缩合剂，以2-4 当量的试剂(前11个氨基酸为2当量，后续的为4当量)，平均1lh／氨基酸的缩 合速度化学合成胸腺索aI；缩合后和脱保护后的洗涤次数均以6次为宜。该条件 下合成的胸腺素伐l的粗品收率为89．9％，纯度为31．2％，目标物胸腺素0【l的收率 为28．0％，单位成本为2．49 RMB／mg胸腺素oLI。分离纯化工艺为：首先以离子交 换层析法对胸腺素al粗品进行初步的分离纯化，以除去粗品中大量的杂质。采 用DEAE Fast Sephamse 的纯度提高到75％，收率为60％。然后以反相高效液相层析法对胸腺素a。进行 最终的纯化。采用c18柱，以O．I％TTA为离子对试剂，乙腈线性梯度洗脱，上 样量为50mg。反相层析后产品的纯度达到95％，收率为60％。两步纯化的总收 率为36％，纯度符合要求，纯化规模达到半制各水平，为胸腺素Ⅸl的工业化奠 定了基础。 此外，还首次K．C．Chou等筛选的抗SARS八肽进行了探索和研究，着重考 察了不同的缩合剂和缩合时间对化学合成抗SARS八肽的影响，建立八肽的合成 工艺和分离纯化工艺。其最佳的合成工艺为：以HBTU为缩合剂，以2当量的 试剂，平均511／氨基酸的缩合速度化学合成八肽。该条件下合成的八肽的粗品收 八肽。其分离纯化工艺为：以制备型RP—HPLC对八肽进行分离纯化，采用c18 柱，以0．I％TFA为离子对试剂，乙腈线性梯度洗脱，上样量为10rag。反相层析 后产品的纯度达到95％，符合对纯度的要求，收率为65％。活性测定结果表明 八肽对SARS病毒有很强的抑制作用，具有开发为治疗SARS的多肽药物的前景。 关键词：固相多肽合成，胸腺素a】，抗SARS八肽，离子交换层析，反相高效 液相层析 Abstract effectsof onchemical of Inthis different reagents synthesis thesis，the coupling studied was were optimalsynthetictechnology thymosin毡1 systemically．The ata was with2-4 acid obtained：the HBTU equiv．m13_inocoupling reagent coupling a of11h aminoacid．Theofcrude was89．9％with rate al purity per yields thymosin was2．49RMB thecost of31．2％．and ofthymosin0L卜Byusingion—exchange mg per highperformanceliqui