胰岛素抵抗大鼠骨骼肌线粒体功能与研究.pdfVIP

胰岛素抵抗大鼠骨骼肌线粒体的功能研究 硕士研究生： 马 靖 指导教师： 杜建玲教授 指导小组： 郭立新教授 专业名称： 内科学 摘 要 目的：研究胰岛素抵抗(insulin 的功能。在高胰岛素．正葡萄糖钳夹实验评价胰岛素敏感性的基础上提取 骨骼肌线粒体，进行呼吸功能测定和脂肪酸p．氧化状态测定，以此来评 价骨骼肌线粒体功能失常与IR是否存在密切关系。 方法： l diabetes 1．建立IR、l型糖尿病(type 2 diabetes 病(type (normal 分为NC组l0只、IR组10只、T1DM组15只、T2DM组15只。其中 NC组和T1 DM组大鼠予普通饲料喂养，IR组和T2DM组大鼠饲以高糖 高脂饲料。喂养8周后对TI DM组大鼠腹腔注射60mg／kg的链脲佐菌素， NC组大鼠腹腔注射等体积的柠檬酸缓冲液；对T2DM组大鼠腹腔注射 30mg／kg的链脲佐菌素建立模型，IR组大鼠腹腔注射等体积的柠檬酸缓 冲液。 2．模型建立成功后对4组大鼠行高胰岛素．正葡萄糖钳夹实验，以 infusion 钳夹过程中60分钟至120分钟的平均葡萄糖输注率(glucose rate，GIR)来反映各组大鼠胰岛素的敏感性。 3．取大鼠比目鱼肌约lg，进行线粒体的分离、纯化，所有操作严 格在4℃状态下进行。采用Clark氧电极法对所提取的新鲜线粒体进行呼 吸功能测定，测得线粒体Ⅲ态呼吸速率与Ⅳ态呼吸速率，二者之比即为 control 线粒体呼吸控制率(respiratoryrate，RCR)。 4．测定线粒体脂肪酸B．氧化状态，一方面通过蛋白质免疫印迹法 (western blot)检测线粒体肉碱脂酰转移酶．I(earnitinepalmitoyl 法测定CPT-I酶活性。 结果： blood 空腹血糖(fasting 5，T2DM组1 IR组4．49士0．71，TIDM组20．904-5．1 3．36士4．56，其中T1DM 0．05)。 Tl DM组，T2DM组的GIR明显低于NC组和T1DM组。 O．05)。 4．Western blot方法检测骨骼肌线粒体的CPT-I蛋白表达，经软件 扫描定量各蛋白条带的相对灰度比值分别为NC组0．434-0．19，IR组 酶活性无明显差异(PO．05)。 结论： 1． IR状态下骨骼肌线粒体呼吸功能受损，CPT-I蛋白表达降低， 骨骼肌线粒体功能失常与IR存在密切关系。 2．高糖状态下骨骼肌线粒体呼吸功能以及脂肪酸B．氧化状态未见 明显异常。 关键词：2型糖尿病 胰岛素抵抗 骨骼肌 线粒体 呼吸控制率 2 in of functioninsulin muscularmitochondrial Study rats resistance Master candidate：Ma degree Jing