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免疫学检验实验教学大纲 卫生检验专业用四川大学华西公共卫生学院教研室编Experimental Pathogenic Biology Technique） 课程号（代码）：504014030 课程类别：专业课程 学时：48 学分：2 二、教学目的要求 专业学生必修的考试课程在教学过程 实验4-1 ELESA（双抗体夹心法）—血清中HBsAg的测定 1、掌握方法的原理，熟悉酶标仪的使用 2、掌握实验的关键点、结果判断及影响因素 在已包被HBsAb的板子中加入待检血清，孵育，洗涤，再加入酶标记HBsAb，孵育，洗涤，加入底物，孵育，终止反应，酶标仪检测。 实验4-2 免疫金层析实验—血清中HBsAg的测定 1、掌握方法的原理 2、掌握实验的结果判断及影响因素 利用吸附在纤维膜上的免疫胶体金（抗体）进行标本中抗原的检测。若标本中有与免疫胶体金相对应的抗原，即可在膜上出现2条红色的线。 将购买的测试条放入待测血清中，数秒后取出，观察红色线是否出现，判断结果。 实验5 ELESA（间接法）—血清中HBcAb的测定 1、掌握方法的原理，熟悉酶标仪的使用 2、掌握实验的关键点、结果判断及影响因素 实验6 免疫荧光技术—标本中水弧菌的检测 1、理解方法的原理，了解荧光显微镜的使用和工作原理 2、掌握实验的关键点、结果判断及影响因素 将待测细菌涂布在玻片上，自然干燥，固定，加上兔抗水弧菌抗体，37℃湿盒30分钟，洗涤后滴加羊抗兔荧光抗体，37℃湿盒30分钟，洗涤，待干后，盖片封片，荧光显微镜观察。 实验7淋巴细胞转化实验 24孔培养板中），一孔加ConA液（相当于7.5μg/ml），一孔作为对照，置CO2培养箱培养68h后，取出培养板，，MTT液（5mg/ml），培养4h。加入酸性异丙醇，溶解紫色结晶。在570nm波长处测定OD值，以加ConA孔OD值的均值减去未加ConA孔OD值的均值代表淋巴细胞的增值能力。 8溶血空斑试验—小鼠抗体生成细胞的检测 1、理解方法的原理 2、掌握实验的关键点、结果判断及影响因素 无菌取出已用绵羊红细胞免疫5天的小鼠脾细胞，碾磨，洗涤，制成脾细胞悬液，在50℃水浴预温，与同样处理的绵羊红细胞悬液、琼脂混合后制板，37℃ CO2 孵箱孵育2h，加入1：8稀释的新鲜补体，37℃ CO2 孵箱孵育2h，计数空斑形成细胞的数量。 实验9 NK细胞活性—乳酸脱氢酶（LDH）测定法 1、理解方法的原理 2、掌握实验的关键点、结果计算及影响因素 当细胞受到NK细胞杀伤后，细胞内的LDH释放到细胞外，加入LDH的底物，即可产生紫红色的产物，经490nm检测，可计算出NK细胞的活性。 取出小鼠脾，制成脾细胞悬液，加入96孔板中，再加入等量靶细胞，37℃ CO2 孵箱孵育4h，离心，取出上清于另一96孔板，加入底物，作用15分钟，加HCI终止反应，490nm测定OD值，按公式计算NK细胞的活性。 实验10 吞噬实验小鼠吞噬细胞吞噬鸡红细胞实验—半体内法 1、理解方法的原理 2、掌握实验的关键点、结果计算及影响因素 取20%绵羊红细胞悬液1ml注入小鼠腹腔，30分钟，再注入2mlNS，揉腹部1分钟，取出腹腔液，滴加在玻片上，37℃湿盒孵育30分钟，NS洗涤、固定、染色，显微镜观察。 七 教材及参考书目 1. 张朝武主编：细菌学检验，人民卫生出版社，2006。 2. 张朝武主编：现代卫生检验，第一版，人民卫生出版社，2005。 . 余倩、许欣主编：卫生微生物检验学细菌学分册，四川科技出版社，2003。 4. 王秀茹主编：预防医学微生物学及检验技术，人民卫生出版社，2002。 学时分 4 双向琼脂扩散 3 免疫电泳 4 单向琼脂扩散 3 总补体活性测定 4 免疫荧光技术 4 免疫金层析实验 2 ELESA（双抗体夹心法） 2 溶血空斑试验 6 吞噬实验小鼠吞噬细胞吞噬鸡红细胞实验 6 NK细胞活性 4 凝集实验 3 免疫印迹 6 总计 48 4