酿酒酵母RRP12多拷贝校正子的筛选及温度敏感突变株的构建.pdf

中山大学硕士研究论文 酿酒酵母胛，?多拷贝校正予的筛选及温度敏感突变株的构建 摘要 DNA复制是生物体维持遗传稳定性的一项重要细胞活动。为了有效地控制 DNA复制，细胞必须严格控制DNA复制起始发生在细胞周期的合适时期。近年 来，本联合实验室通过遗传学筛选方法发现了尉Pj2。Rrpl2p是核糖体生物合 成必需的蛋白，它同时也是复制前复合物的重要组成部分。 为了进一步研究 在RRPl2的多拷贝校正子实验中，我们以rrpl2．td为起始菌株，通过多拷 贝基因组文库的表达，筛选能在38℃有效校正rrpl2-td温度敏感表型的菌株。 经过几轮的筛选，我们最终发现了两个多拷贝校正子，并通过测序确认两个都为 REPl。通过生物信息学分析，我们发现REPl与2mu质粒的维持和质粒的分离 有关。 通过质粒间隙修复技术在rrpl2一td中构建了RRPl2的突变文库。经过几轮筛选 后，我们找到一个可能的rrpl2．ts候选菌株，并正在构建rrpl222菌株以最终确 认rrpl2一ts的温度敏感表型。 关键词：RRPJ2DNA复制起始的蛋白多拷贝校正 易错PCR随机诱变 中山大学硕士研究论文 酿酒酵母埘删多拷贝校正子的筛选及温度敏感突变株的构建