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实验: 离子交换柱层析法 分离氨基酸 一、实验目的与要求： 掌握离子交换柱层析法分离氨基酸的基本原理 掌握离子交换柱层析的基本操作方法 二、实验原理 树脂：惰性水不溶性高分 子物质 如聚氯乙烯 离子交换树脂 离子：阴离子 如-NH3OH- 阳离子 如-SO3H+ -NH3OH -NH3+ + OH- -SO3H -SO3- + H+ - SO3- + AA+ -SO3-AA+ 交换了H+即阳离子 -NH3+ + AA- -NH3+AA- 交换了OH-即阴离子 三、实验操作方法 树脂处理 装柱 平衡 上样 洗脱及收集 显色 测定 四、实验结果与分析 根据测定的OD值，以OD值为纵坐标，管号为横坐标，作出ASP及Lys 的洗脱曲线。 根据测定OD值，以OD值为纵坐标，管号为横坐标，作出混合样的洗脱曲线。 找出混合样中有几种氨基酸，并与标样曲线比较确定是什么氨基酸。 五、实验注意事项 树脂处理时，水洗一定要多冲洗并至中性 装柱时防止有气泡和断层 上样时，样品一定要一次性进树脂 洗脱时流速不能过快并要求匀速 显色时，应避免试管液体挥发干，多少不一 测定时，各管液体体积应一样多 * * 1.离子交换树脂的组成及类型 2.离子交换树脂的作用机制 在同一PH溶液中，各氨基酸因 (1)pI不同：导致各氨基酸所带电荷的性质与多少不同 (2)极性不同：与树脂的吸附力 因此各氨基酸与离子交换树脂的亲和力有差异， 洗脱时可依亲和力从小到大的顺序洗脱下来而达到分离。 3.分离原理
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