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细胞工程 (2)过程②表示动物细胞培养,培养过程中出现接触抑制现象后,可以用胰蛋白酶处理,使之分散成单个细胞,随后分装到新的培养瓶中进行传代培养。 (3)判断目的基因是否在受体细胞中转录,可用分子杂交技术来检测,从细胞中提取mRNA和用放射性同位素或者荧光标记的目的基因单链DNA片段进行杂交。根据题中信息“肺细胞中的let-7基因表达减弱,癌基因RAS表达增强,会引发肺癌”可知,导入let-7基因后,肺癌细胞的增殖受到抑制; 据图2可知,let-7基因影响RAS基因表达的机理是:let-7基因转录产物miRNA与RAS基因转录产物RAS mRNA结合,使RAS基因翻译受到抑制,引起细胞中的RAS蛋白含量减少,进而导致癌细胞增殖受抑制。 【答案】 (1)限制性核酸内切(或限制) 启动子 (2)胰蛋白 (3)RNA RAS蛋白 1.动物细胞培养与植物组织培养的比较 细胞工程(或细胞克隆) 项目 动物细胞培养 植物组织培养 培养前 处理 无菌、用胰蛋白酶处理,使组织细胞相互分散开 无菌、离体 培养基 成分 葡萄糖、氨基酸、无机盐、促生长因子、微量元素、动物血清等 矿质元素、蔗糖、维生素、植物激素等 培养基 状态 液体培养基 固体培养基 过程 动物胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织→原代培养→传代培养→细胞群 能否培 养成个 体 不能 能 应用 举例 大规模生产有重要价值的生物制品,如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等;皮肤移植;检测有毒物质的毒性等 快速繁殖、培育无病毒植株;生产药物;制造人工种子;培育转基因作物等 【拓展延伸】 生产单克隆抗体的三种方法 1.利用动物细胞融合技术形成的杂交瘤细胞生产单克隆抗体。 2.将目的基因导入浆细胞,利用基因工程生产单克隆抗体。 3.利用动物细胞核移植技术生产单克隆抗体。 据图回答下列问题: (1)过程①所需的酶是____________________ 。 (2)过程②后,在显微镜下观察融合的活细胞中有供体的________存在,这一特征可作为初步筛选杂种细胞的标志。 (3)原生质体培养液中需要加入适宜浓度的甘露醇以保持一定的渗透压,其作用是______________________。原生质体经过________再生,进而分裂和脱分化形成愈伤组织。 (4)若分析再生植株的染色体变异类型,应剪取再生植株和 ________植株的根尖,通过________、________、染色和制片等过程制成装片,然后在显微镜下观察比较染色体的形态和数目。 【解析】 熟记植物体细胞杂交过程,准确解读信息是解题关键。 (1)获取植物细胞的原生质体可用纤维素酶和果胶酶处理植物细胞。(2)根据题干信息可知,供体使用的是叶肉细胞的原生质体,所以可将融合的细胞是否含叶绿体作为初步筛选杂种细胞的标志。(3)原生质体因没有了细胞壁,在低渗溶液中容易吸水涨破,加入甘露醇可保持一定的渗透压,以保持原生质体的完整性。原生质体需再生出细胞壁形成杂种细胞,然后经分裂、脱分化形成愈伤组织。 (4)若要分析再生植株的染色体变异类型,需对再生植株细胞和双亲细胞的染色体形态与数目进行比较。植物细胞有丝分裂装片的制作包括解离、漂洗、染色和制片四个步骤。(5)由图可知,植株1、2、4的条带中除了具有花椰菜的DNA片段外,还有来自黑芥的DNA片段,所以是杂种植株。(6)对杂种植株进行病原体(黑腐病菌)接种实验,若不患黑腐病,即为高抗性杂种植株。 【答案】 (1)纤维素酶和果胶酶 (2)叶绿体 (3)保持原生质体完整性 细胞壁 (4)双亲(或花椰菜和黑芥) 解离 漂洗 (5)1、2、4 (6)黑腐病菌 1.(2013·江苏高考T22-B)用PCR方法扩增目的基因时不必知道基因的全部序列。(√) 2.(2013·大纲全国卷T2-B)动物细胞培养和植物组织培养过程中都要用到胰蛋白酶。(×) 【提示】 植物组织培养不需要用胰蛋白酶。 3.(2013·重庆高考T5-C)愈伤组织培养后的出芽是细胞再分化的结果,受基因选择性表达的调控。(√) 4.(2012·广东高考T2-B)培养草莓脱毒苗所采用的主要技术是细胞杂交。(×) 【提示】 主要技术应为组织培养。 5.(2011·江苏高考T14-B)体细胞杂交技术可用于克隆动物和制备单克隆抗体。(×) 【提示】 体细胞杂交技术,目前仅指用于植物体细胞杂交,由此获得杂交植株。 6.(2011·四川高考T5-D)应用DNA探针技术可以检测到转基因抗冻番茄植株中目的基因的存在及其完全表达。(×) 【提示】 DNA探针杂交技术只能检测到目的基因的存在,而不能检测其是否翻译出蛋白质。 (1)图1的一条脱氧核苷酸链中相邻两个碱基之间依次由____________连接。 (2)若用限制酶SmaⅠ完全切割图1中DNA
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