硅胶G柱层析法制备卵黄卵磷脂工艺的研究.pdfVIP

第30卷总第75期 西 北 民族 大 学 学报(自然科学版) Vo1．30．No．3 2009年 9月 JournalofNorthwestUniversityforNationalities(NaturalScience) Sep，2009 硅胶G柱层析法制备卵黄卵磷脂工艺的研究 减荣鑫 ，杨具 田 ，蔡 勇2，徐红伟 (1．西北民族大学 生命科学与工程学院，甘肃 兰州 730030；2．西北民族大学 实验 中心，甘肃 兰州 730030) [摘 要】以鸡蛋卵黄为材料，采用二元有机溶剂为提取剂，丙酮为沉淀剂，应用正交试验确定 卵黄卵磷脂的最佳提 取条件；选择硅胶G为吸附剂，以不同有机溶剂配比组成的洗脱体系为洗脱剂，经单 因素试验柱层析法纯化卵磷脂 ．结 果表 明：提取温度 25℃，提取时间60rain，醇醚体积 比4：1提取效果最佳 ；无水 乙醇、甲醇混合溶剂为最佳纯化洗脱剂组 合。并获得了纯度达 99．3％的卵黄卵磷脂 ． [关键词]蛋黄卵磷脂；硅胶G柱层析；分离纯化 [中图分类号]0658．11 [文献标识码]A [文章编号]1009—2102(2009)03～0042—03 卵磷脂是一种含磷酸的类脂化合物，构成生物膜的基本组成成分，具有较高的营养价值和生理调节 机能，被誉为 “第三营养素”，广泛应用在医药行业 ．近年来，国内对高品质卵磷脂需求越来越大，因此， 探索高品质卵磷脂生产的技术工艺十分必要 ． 本研究以乙醇、乙醚二元有机溶剂为提取剂，丙酮为沉淀剂，从蛋黄中提取卵磷脂，并利用硅胶G 柱层析法进行纯化，获得卵磷脂的纯度高达99．3％．该工艺简便易行，溶剂易回收，制备成本低廉，产品 纯度高 ． 1 材料与方法 1．1 材料 甲醇、无水乙醇、95％乙醇、乙醚、丙酮、氯仿、硅胶 G、柱层析硅胶、羧 甲基纤维素钠等均为国产分析 纯；鸡蛋(兰州正大公司)；卵磷脂标准品(Sigma)． 1．2 仪器设备 EYELA一1000S旋转蒸发仪 ；真空干燥箱；层析系统；N2000色谱工作站 ；SP一1900UV紫外分光 光度计等 ． 1．3 方法 1．3．1 卵磷脂的提取 采用正交试验以乙醇、乙醚二元有机溶剂为提取剂，丙酮为沉淀剂，从蛋黄中提取卵磷脂 ．提取过 程：取5g蛋黄置于洁净的具塞三角瓶中，分别加适量的95％乙醇、乙醚，充分搅拌后静置30rain，过滤； 低温减压浓缩滤液，加适量丙酮沉淀，过滤；丙酮冲洗滤饼，干燥，即得卵磷脂粗品 ． 1．3．2 卵磷脂的纯化 取适量硅胶 G活化，装柱，上样，平衡，洗脱 ．依据色谱工作站获得的结果，薄层层析法鉴定、紫外 [收稿 日期】2009—04—20 [作者简介]臧荣鑫 (1968一)，男，甘肃天水人，副教授，研究方向：动物种质资源 ． 一 42 ～ 吸收光谱鉴定的结果，将卵磷脂峰对应的洗脱液收集后丙酮沉淀，过滤；丙酮冲洗滤饼，干燥，即获得纯 化卵磷脂 ． 1．3．3 卵磷脂的鉴定 1．3。3．1 薄层层析法鉴定 取硅胶 G适量，以羧甲基纤维素钠溶液谓成糊状，制板，自然阴干 ．使用前于 120℃活化 1～2h， 点样，层析，显色 1．3．3．2 紫外吸收光谱鉴定 分别取卵磷脂标准品和样品乙醇溶液在200~600一ilm进行光谱扫描，以标准品吸收曲线、最大吸 收峰为对照，对样品进行定性鉴定 ． 1．3．3．3 卵磷脂含量、纯度i昊I定 ① 标准曲线的制备 取卵磷脂标准品进行梯度稀释，在213啦 下分别对各梯度进行吸光度测定， 以卵磷脂的浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制卵磷脂标准曲线 ． ② 含量、纯度测定 按一定比例稀释样品，在213lira下检测样品的吸光度，与标准曲线对照，获得 样品中卵磷脂的浓度，计算样品中卵磷脂的含量 ．以下列公式计算卵磷脂纯度 ． 卵磷脂纯度=纯化卵磷脂样品中卵磷脂含量／纯化卵磷脂样品质量X100％ 2 结果与分析 2．1 卵磷脂的提取 采用正交试验，研究了提取时间、提取温度和醇醚体积比等三因素对提取卵磷脂提取效果的影响， 结果见表 1，结果表明：卵磷脂提取主次因素是B：c—A，说明提取时间和醇醚体积比对卵磷脂的提取 影响较大，温度的影响次之 ． 表 1 正交试验结果 2