腺病毒介导的HSV—tk／GCV自杀基因系统靶向性治疗前列腺癌的实验研究.pdfVIP

第 15 期 天 津 医 科 大 学 学 报 Vo1．15，No．4 2009年 12月 JOURNALOFTIANJINMEDICALUNIVERSITY Dec．2009 689 腺病毒介导的HSV—tk／GCV 自杀基因系统 靶向性治疗前列腺癌的实验研究 白志杰，黎 玮，王亚轩，张 勇，马洪顺 (天津市第一中心医院泌尿外科，天津 300192) [摘要]目的：观察腺病毒介导单纯疱疹病毒胸苷激酶基因／丙氧鸟苷(HSV—tk／GCV)自杀基因系统在人端粒酶逆转录 酶(hTERT)启动子调控下对人前列腺癌细胞的靶向性体外杀伤效应。方法：利用不同感染复数(MOI)的重组腺病毒携 带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因感染前列腺癌细胞 LNCaP和人成纤维细胞 MRC一5，荧光显微镜下观察其感染效 率：利用携带不同启动子的重组腺病毒Ad—hTERT～HSVT／K以及Ad—CMV—HSVq／X感染LNCaP和MRC一5细胞，加 入不同浓度GCV，MTY法观察受转染细胞的存活率。结果：重组腺病毒Ad—hTERT—EGFP能特异地转染LNCaP，其转 染效率随重组病毒的M0I增加而升高(P0．01)，M0I为 1时转染率为8．3％，MOI为 1o0o时转染率达 100％；应用GCV 处理后 ，Ad—CMV—HSWTK对 LNCaP和 MRC一5细胞均有杀伤作用 ，而Ad—hTERTp—HSV／TK只杀伤LNCaP (P 0．0O1)，随着MOI和GCV浓度的增加，LNCaP细胞存活率明显降低(PO．叭)，MOI为 1和GCV浓度为 1I~mol／L时存活 率为95．4％。MOI为 100和GCV浓度为 1000btmo1]L时存活率仅为6．1％，并有旁观者效应。结论：重组腺病毒携带 EGFP报告基因可准确、简便地确定转染效率：hTERT启动子调控的重组腺病毒介导的HSV—t~GCV自杀基因系统对 人前列腺癌细胞有靶向杀伤作用 [关键词]前列腺癌；重组腺病毒；自杀基因；人端粒酶逆转录酶启动子 [中图分类号]R737．25 [文献标识码】A [文章编号]1006—8147(2009)04—0689—04 TheselectivekillingeffectofHSV-TK／GCV suicidegene system mediatedbyadenovirusonprostatecancercells BAIZhi-jie，LIWei，WANGYa-xuan，ZHANGYong，MAHong-shun (DepartmentofUrology，TheFirstCentralHospital，Tianjin300192，China) ABSTRACT Objective：Toobservetheselectivekillingeffectofherpessimplexvirus—thymidinekinase／ ganciclovir(HSV—TK／GCV、suicidegenesystemmediatedbyadenovirusandcontrolledbyhumantelomerase reversetranseriptase(hTERT)promoteronprostatecancercellsinvitro．Methods：Prostatecancercellline LNCaPandhumanfibroblastcelllineMRC-5weretransfectedbytherecombinantadenoviursofdifferent multiplicitiesofinfection(MOI)，andtheinfectionratewasmeasuredbyobservingtheexpressionofenhanced greenfluorescentprotein (EG