多质粒共转染建立Cav1.3 L-型钙通道的研究模型.pdfVIP

陕西医学杂志 2009年 6月第 38卷第 6期 643 · 论著 ·基础研究 · 多质粒共转染建立Cav1．3L一型钙通道的研究模型 西安交通大学医学院第一附属医院心内科 ，教育部环境与疾病相关基 因重点实验室 离子通道病室 (西安 710061) 强 华 魏 峰 张爱峰 史瑞明 孙超峰一 马爱群 摘 要 目的：提高多质粒转染效率，建立钙 离子通道的研 究模 型。方法：在传统的脂质体 转染过程 中，通过不断调整细胞密度、转染质粒 DNA 的量，将含 Cav1．3L一型钙通道相关亚基 的 质粒 DNA转染至HEK293T细胞 ，采用全细胞膜片钳技术检测Cav1．3L一型钙通道的电流表达。 结果 ：转染后的HEK293T细胞在 荧光显微镜下可见明显的绿色荧光；全细胞膜 片钳技术检测出 Cav1．3L一型钙通道 电流的表达。结论 ：通过调整细胞密度和转染质粒DNA的量，可以提 高脂质 体介导多质粒共转染 HEK293T细胞的效率，建立钙 离子通道的研究模型。 主题词 钙通道，L型 基 因 脂质体 @人胚胎 肾293T细胞 A studyonthemodelofCalcium Ion ChannelbyCO—transfectionof multi—Plasmid DNA recombinant DepartmentofCardiovascularM edicine，theFirstAffiliatedHospital，M edical SchoolofXi’anJiaotongUniversity，InstituteofCardiovascularChannelopathy，Key LaboratoryofEnvironmentandGenesRelatedtoDiseasesMinistryofEducation (Xi’an710061) QiangHua WeiFeng ZhangAifeng etal ABSTRACT Objective：Toenhancetheefficiencyofmulti—plasmidco—transfectionandestablisha researchmodelofcalcium ionchanne1．M ethods：Intheprocessofconventionaltransfectionusinglipofectamin， plasm id DNA recombinantwith subunitsrelated to Cav1．3 L—type calcium channelwasco—transfected into HEK293T cellsbyadjustingthecelldensityandquantityofplasmidDNA．ThecurrentexpressionofCav1．3L— typecalcium channelwasdetected by whole—cellpatch—clamp technique．Results：Thetransfected HEK293T ceilsdisplayedgreenfluorescenceunderthefluorescencem icroscope．AndthecurrentexpressionofCav1．3L— typecalcium channelhasalsobeendetected．Conclusions：Byadjustingthecelldensityandquantityofplasmid DNA ，theefficiencyofmulti—plasmidCO—transtectionintoHEK293T cellsmediatedbylipofectam in isefficiently enhancedandthestudymodelofCav1．3L—typecalcium channelisalsoest