大肠杆菌为何能用来生产胰岛素.pdfVIP

生物学教学2009年(第34卷2筮 塑 · 67 · 大肠杆菌为何能用来生产胰岛素 汪兴泽 (江苏省泰兴市第一高级中学 225400) l 问题提出 组负责B链的合成，上海有机化学研究所由汪猷领导 在一次模拟考试中，有一道试题需判断能否将胰 的小组以及北京大学由邢其毅领导的小组共同负责A 岛素基因导人大肠杆菌，用来生产胰岛素。让大部分 链的合成，两条链都是通过传统的片段缩合法来合成。 学生和一些教师感到疑惑的是：大肠杆菌是原核生物， 邹承鲁领导的小组负责两条肽链的组合。B链的合成 既没有内质网，也没有高尔基体 ，而胰岛素是分泌蛋 以及由人工合成的B链与天然的A链构建成胰岛素 白，大肠杆菌是怎样加工和分泌胰岛素的呢? 首先获得成功，此后A链的合成也最终获得成功。在 2 我国人工合成牛胰岛素的艰辛历程 1965年9月 17日，中国在世界上首次用人工方法合成 众所周知 ，我国科学家率先合成具有生物活性 的 了结晶牛胰岛素。 结晶牛胰岛素，回顾我国人工合成牛胰岛素的艰辛历 3 利用基因工程菌生产人胰岛素 程，对认识将胰岛素基因导人大肠杆菌，能用于生产胰 在利用基因工程菌生产胰岛素之前，人类已发明 岛素这一正确的结论有重要意义。 了从人的胰脏中直接提取胰岛素、由单个氨基酸直接 1958年确定人工合成胰岛素的课题。胰岛素分 化学合成、由猪胰岛素化学转型为人胰岛素等方法，但 子中含有3对二硫键 ，其 中2对二硫键在 A链和 B链 这些方法受原料限制 ，成本高。1982年，美 国的Ely 之间形成，另1对二硫键在A链上。在考虑的各种合 LiLi公司首先使用重组大肠杆菌生产人胰岛素，．这是 成方案中，最切实可行 的方案是分别合成 A链和 B 第一个上市的基 因工程药物。5年后，Novo公司开发 链，然后通过巯基的氧化使两条链正确组合。 了利用重组酵母菌生产人胰 岛素的新工艺。长期 以 北京生物物理研究所邹承鲁所在小组的任务是摸 来，人们已开发了多种大肠杆菌工程菌，但具有代表性 索胰岛素分子经过还原、分离纯化之后得到的A链和 和实用型的构建方案主要有以下三种。 B链怎样重新组合成天然的胰岛素分子。历经艰辛， 3．1 AB链分别表达法 该方法中A链和B链的编码 他们最终发现了不使用氧化剂而在低温下由空气缓慢 区由化学合成 ，两个 DNA片段分别插在含有Ptac启动 氧化的方法完成。所得到的粗产物经进一步纯化和结 子和B一半乳糖苷酶基因的表达型质粒上，后者与胰 晶，终于得到和天然胰岛素具有相同活力和晶型的晶 岛素编码序列形成杂合基 因，其连接位点处为甲硫氨 体。并且胰蛋白酶水解物双向纸层析和电泳的结果进 酸编码。重组分子分别导人大肠杆菌，两种工程菌分 一 步证实氧化后所得的胰岛素与天然胰岛素完全相同 别合成 B一半乳糖苷酶一人胰岛素A链、B一半乳糖苷 (我国科学家在 1959年秋得出这些重要的结论，后来 酶一人胰岛素 B链两种融合蛋白。经大规模发酵后， 被国外其他实验室证实。现已应用到工业生产中)。 从菌体中分离纯化融合蛋白，再用溴化氰在甲硫氨酸 上海生物化学研究所由钮经义和龚岳亭领导的小 残基的C端化学切断融合蛋白，释放 出人胰 岛素的A 方式是 自由扩散 ，且主要被吸收进入毛细淋巴管中。 例22 关于生态系统组成成分 的正确叙述是 例21 脂质物质从被小肠绒毛上皮细胞吸收开始， ( ) 到被输送到各部位组织细胞，依次经