大蹼铃蟾皮肤白蛋白的分离纯化及抗体制备.pdfVIP

第 24卷 第 1期 内蒙古民族大学学报(自然科学版) Vo1．24 No．1 2009年 1月 JournalofInnerMongoliaUniversityforNationalities Jan．2009 大蹼铃蟾皮肤 白蛋白的分离纯化及抗体制备 张英霞 ，满初 日嘎 ，张 云 (1．海南大学海洋学院，海南 海口 570228；2．海南大学生命科学与农学院，海南 海口 570228； 3．中国科学院 昆明动物研究所，云南 昆明 650223) [摘 要]通过离子交换层析和凝胶过滤层析 ，在大蹼铃蟾 (Bombinamaxima)皮肤 中得到其 白蛋 白 (BmA—skin)．该蛋白具有较强的胰蛋 白酶抑制活性．用0．5mg／只BmA—skin作为免疫源免疫大白兔，经三次免 疫后，抽取大白兔血液，分离血清，饱和硫酸氨沉淀，获得抗BmA—skin的多克隆抗体．经ELISA方法测定该抗 体与大蹼铃蟾白蛋白发生免疫反应，抗体滴度为 1：100000． [关键词]大蹼铃蟾；白蛋白；多克隆抗体 [中图分类号]Q959．53 [文献标识码]A [文章编号]1671—0185(2o09)Ol一0044—04 PurificationandAntibodyPreparation 0fS nAlbuminfrom Bombinamaxima ZHANG Ying—xia，Manchuriga，ZHANGYun (1．TheOceanCollege，HainanUniversity，Haikou570228，China； 2．TheCollegeofLifeScienceandAgriculture，HainanUniversity，Haikou570228，China； 3．KunmingInstituteofZoology，TheChineseAcademyofSciences，Kunming650223，China) Abstract：SkinalbuminofBombinamaxima(BmA-skin)wasobtainedthroughthestepsofmixing ion-exchange and gelfiltration chromatography．Theprotein distinctly inhibited trypsin．The purifiedBmA——skinwasusedtoimmunizerabbitstopreparepolyclonalantibodywiththedosageof 0．5mg／perrabbit．Afterimmunizedthreetimes，therabbitswereanesthetizedwithether，thenthe bloodwascollectedby acardiacpuncture，andprecipitatewith saturatedammonium sulfateto obtainpolyclonalantibody．ELISA datademonstratedthattheantibodytiteroftheserum wasupto1： 100000．TheantiBmA—skinpolyclonalantibodyhadahighqualityofpotencyandspecificity． Keywords：Bombinamaxima；albumin；polyclonalantibody 血清 白蛋白是脊椎动物血浆中含量最丰富的蛋白质，通常由肝脏合成，约占血浆总蛋白的一半．人血清 白蛋白(human serumalbumin。HSA)是由585个氨基酸组成的单链蛋白质，分子量为67kD，为非糖蛋白质．成熟的HSA是一个心形分子，由 三个结构相似的d一