蛋白质工程崛起.pptVIP

基 因 枪 法 打一枪即可10000个整合细胞/枪 火药、气压等 300-600米/秒 DNA随机插入，原理不明 目的基因导入动物细胞 如：显微注射法 DNA损失少 无需选择标记基因整合效率高 目的基因的检测和表达 基因克隆→用于在选定的host中表达 但是 克隆的基因不一定能表达 克隆载体不一定是好的表达载体 目的基因是否进入受体细胞，你如何去察觉？ 一、蛋白质工程崛起的缘由 满足人类生产和生活的需要 例如： 改造 干扰素（半胱氨酸） 体外很难保存 干扰素（丝氨酸） 体外可以保存半年 玉米中赖氨酸含量比较低 天冬氨酸激酶 （352位的苏氨酸） 二氢吡啶二羧酸合成酶（104位的天冬酰胺） 改造 改造 天冬氨酸激酶（异亮氨酸） 二氢吡啶二羧酸合成酶（异亮氨酸） 玉米中赖氨酸含量可提高数倍 蛋白质工程的概念 蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造或制造一种新的蛋白质，以满足人类对生产和生活的需求。 蛋白质工程的概念 基础: 蛋白质工程的实质： 途径: 目标: 蛋白质的结构和功能 基因修饰或基因合成 改造或制造新的蛋白质，满足人类的生产或生活的需要 是对编码蛋白质的基因进行改造 又称为第二代基因工程 注： 对基因进行改造的蛋白质可使基因控制的性状遗传下去，而直接改造蛋白质却不能遗传。 蛋白质工程的流程 基因 DNA 氨基酸序列 多肽链 蛋白质 三维结构 预期功能 生物功能 mRNA 转录 翻译 折叠 DNA合成 分子设计 蛋白质工程原理 天然蛋白质的合成途径： 基因　　　表达（转录和翻译）　　　　形成氨基酸序列的多肽 链　　　　形成具有高级结构的蛋白质　　　　行使生物功能 预期的蛋白质功能出发　　　设计预期的蛋白质结构　　　推测 应有的氨基酸序列　　　找到相应的脱氧核苷酸序列酸 蛋白质工程的途径： 蛋白质工程的主要步骤通常包括： （1）从生物体中分离纯化目的蛋白； （2）测定其氨基酸序列； （3）借助核磁共振和X射线晶体衍射等手段，尽可能地了解蛋白质的二维结构和三维晶体结构; （4）设计各种处理条件，了解蛋白质的结构变化，包括折叠与去折叠等对其活性与功能的影响； （5）设计编码该蛋白的基因改造方案，如点突变； （6）分离、纯化新蛋白，功能检测后投入实际使用。 一级结构：组成蛋白质多肽链的线性氨基酸序列。 二级结构：依靠不同氨基酸之间的C=O和N-H基团间的氢键形成的稳定结构，主要为α螺旋和β折叠。 三级结构：通过多个二级结构元素在三维空间的排列所形成的一个蛋白质分子的三维结构。 四级结构：用于描述由不同多肽链（亚基）间相互作用形成具有功能的蛋白质复合物分子。 蛋白质的二级结构 胰岛素的三级结构 血红蛋白质的四级结构 返回 三、蛋白质工程的进展和前景 成功的例子不多，主要是因为蛋白质发挥其功能需要依赖于正确的空间结构，而科学家目前对大多数蛋白质的空间结构了解很少 . 现状： 进展和前景： ①对某些药物进行改造，使之成为速效药品 ②制作电子元件 蛋白质工程在实施中的对大难题： 对大多数蛋白质的高级结构的了解还很不清楚 首先应该根据密码子推出mRNA序列，再根据碱基互补配对原则推出脱氧核苷酸序列。 确定目的基因的碱基序列后，就可以根据人类的需要，从基因库中获取并改造它，或通过人工合成的方法得到它。 1、已知某多肽链的一段氨基酸序列是：…—丙氨酸—色氨酸—赖氨酸—甲硫氨酸—苯丙氨酸—…怎样得出决定这一段肽链的脱氧核苷酸序列？请把相应的碱基序列写出来。 2、确定目的基因的碱基序列后，怎样才能获得目的基因（DNA）？ 讨 论 基因工程是遵循中心法则，从DNA→mRNA→蛋白质→折叠产生功能，基本上是生产出自然界已有的蛋白质。 2、蛋白质工程操作程序的基本思路与基因工程有什么不同？ 蛋白质工程是按照以下思路进行的：确定蛋白质的功能→蛋白质应有的高级结构→蛋白质应具备的折叠状态→应有的氨基酸序列→应有的碱基排列，可以创造自然界不存在的蛋白质 。 思考与探究 1 ．关于生物体内存在的天然蛋白质，下列说法不正确的是（ ） A．是生物在长期进化过程中形成的 B．它们的结构和功能符合特定物种生存的需要 C．构成天然蛋白质的氨基酸目前发现的有20种 D．一定完全符合人类生产和生活的需要 练习 D 2、以下关于蛋白质工程的说法正确的是（　　） A、蛋白质工程以基因工程为基础 B、蛋白质工程就是酶工程的延伸 C、蛋白质工程就是用蛋白酶对蛋白质进行改造 D、蛋白质工程只能生产天然的蛋白质 Ａ 2、蛋白质工程的基本流程正确的是（　　　） ①蛋白质分子结构设计②DNA合成③预期蛋白质功能④根据氨基酸序列推出脱氧核苷酸序列 A．①②③④