牛乳腺上皮细胞中β-酪蛋白检测.pdfVIP

牛乳腺上皮细胞中 -酪蛋白的检测 摘 要 本文旨在建立准确 灵敏 简便的检测 -酪蛋白的方法 以此来衡量体外培养乳 腺细胞的生理功能及分化状态 同时为在细胞水平上研究不同激素对酪蛋白表达调控 乳腺特异性表达载体的评价等相关研究提供有力的手段 用牛 -酪蛋白 纯度90%以上 免疫新西兰大白兔 获得兔抗牛 -酪蛋白多克隆 抗体 经双向琼脂扩散检测其效价为 1:32并通过免疫印迹方法验证其为 -酪蛋白特 异性抗体 建立了 -酪蛋白在蛋白水平及转录水平的检测方法 在蛋白水平上 利用所获得 的抗体 建立了检测 -酪蛋白的ELISA方法 并比较了双抗夹心ELISA方法和间接竞 争ELISA方法 实验结果显示 双抗夹心ELISA方法的灵敏度达10ng/ml间接竞争ELISA 方法的灵敏度达 150ng/ml左右 相比较而言 双抗夹心ELISA方法灵敏度更高 方法 更简便 在转录水平 利用所合成的 -酪蛋白引物 建立了 RT-PCR检测 -酪蛋白的 方法 应用双抗夹心ELISA方法和RT-PCR方法 我们均检测到了从牛初乳中分离的乳 腺上皮细胞中的 -酪蛋白 应用上皮细胞特异蛋白角蛋白 18单克隆抗体 对体外培养的乳腺上皮细胞进行鉴 定 结果呈阳性 证明所建细胞系具有乳腺上皮细胞特性 -酪蛋白的表达必须通过包括促乳素在内的激素诱导 在实验中 我们尝试了应 用促乳素 胰岛素和糖皮质激素对实验室建立的体外培养的牛乳腺上皮细胞系进行激 素诱导 并通过建立的方法对其中的 -酪蛋白进行检测 但是未在此细胞系中检测到 -酪蛋白 关键词 牛 -酪蛋白 乳腺上皮细胞 2 detection of -casein in bovine mammary epithelial cells Zhang YueYun Supervised by prof. Li Wenrong Abstract The purpose of this article is to establish methods which can detect - casein of cultured bovine mammary epithelial cells in vitro exactly and conveniently. These methods can be used to measure the physiological function and differentiation of cultured bovine mammary epithelial cells in vitro. And it is also useful to estimate expression of casein regulated by hormones at cell level. Established the methods to detect -casein at protein level and transcription level. First, we used the bovine -casein purchased from Sigma company to immunize the New Zealand Rabbits. And we obtained the antibody of -casein. At protein level, we established the two ELISA methods to detect -casein using the obtained antibody. And we compared the double antibody