促红细胞生成素对大鼠急性脊髓损伤后后肢功能及NF-κB表达影响的实验研究.pdf

中文摘要 促红细胞生成素对大鼠急性脊髓损伤后后肢功能 及NF—KB表达影响的实验研究 摘 要 目的：人工造成大鼠急性脊髓损伤(SCI)的动物实验 模型，通过对注射促红细胞生成素(EPO)后不同时间点大 鼠后肢行为功能评分的测定，反映EP0对于大鼠SCI后神经 功能恢复的影响，并与甲基强的松龙(MP)的治疗效果进行 比较。同时测定不同时间点脊髓组织内NF—KB表达的变化， 观察EP0对SCI后NF—KB表达的影响，探讨其对SCI的治 疗机制及NF—KB在继发性损伤中的作用，为临床上急性脊 髓损伤的治疗提供实验依据。 随机分为4组：空白对照组(n=5)：仅切除椎板，不损伤 脊髓；损伤组(n=24)：损伤脊髓，但不治疗；EP0治疗组 ofbw腹腔注 伤后使用MP治疗。10％水合氯醛0．4ml／1009 射麻醉后，将大鼠俯卧固定于手术台上，背部正中背皮，无 菌条件下进行背部中段正中切口，显露h棘突椎板，仔细咬 弧形光滑金属垫片压迫于该段脊髓后正中，压迫时间为 5min，致以中度脊髓损伤。空白对照组仅切除椎板，暴露脊 髓，不造成脊髓损伤，以供对照。EP0治疗组与MP组均与伤 of 后15分钟分别静脉注射rhEP01000u／kgbw、甲基强的松 ofbw。空白对照组及损伤组均注射生理盐水。 龙30mg／kg 中文摘要 评分法及斜板试验法对大鼠后肢神经功能恢复情况进行评 价。另外，与术后各时间点对处死大鼠脊髓组织行HE染色， 观察组织病理变化。术后早期4h、8h、12h、ld、3d、5d、 7d对所作脊髓切片行NF—KB免疫组化染色，半定量分析各 组NF—KB表达量的变化。 结果：空白组脊髓组织结构正常，神经元形态完好，尼 氏小体清晰可见，外周白质区轴突正常。损伤组表现为脊髓 组织水肿、弥漫性出血，囊腔及空泡形成，神经元变性，乃 至消失，尼氏小体分辨不清，周围大量炎症细胞浸润，瘢痕 增生，轴索退变，轴索与髓鞘之间空隙加大。损伤组术后5d 组织水肿最为明显，炎症反应重。术后7d时组织切片显示， 脊髓水肿减轻，可辨别神经元形态，治疗组较损伤组组织损 伤轻，结构保存好，炎症反应轻。术后14d组织水肿基本消 退，灰、白质内出现坏死、空洞，神经元形态清楚，白质区 结构紊乱，两治疗组组织破坏程度较轻，炎症反应明显减弱， 其中EPO组较MP组神经元丰富，结构清晰。 空白对照组肢体功能正常，斜板角度保持在60度以上， BBB评分为21分。损伤组大鼠在手术后1d出现后肢无运动 或仅有关节轻度运动，斜板角度值为21．33±1．15，BBB评 分仅为0．33±0．58，随着时间的延长逐渐开始恢复运动功 能，至14d时均升至最大，斜板角度值为30．00±3．00，BBB 评分仅为8．67±0．58。EP0组大鼠术后4h即可见后肢关节 有轻度运动，12h时后肢神经功能已有明显恢复，出现关节 大幅度运动，1d时BBB评分已达4．00±1．00，斜板角度值 中文摘要 时基本接近正常。MP组较EP0组恢复缓慢，术后1d时才见 有功能恢复表现，14d时虽然肢体运功已有明显恢复，但仍 存在显著性差异(P0．01)。与损伤组相比，两治疗组大鼠后 肢神经功能均有明显恢复。可见，两治疗组均较损伤组恢复 较快，其中，EP0组恢复更早、更为迅速。 空白对照组仅见极少量的NF—KB阳性细胞。损伤组大鼠 伤后4hNF—KB已有明显表达，12h达峰值，为55．69±0．55， 以后逐渐降低，至7d时降至最低，接近正常水平。EP0组伤 后也显示有大量的NF—KB表达，变化趋势于与损伤组基本 一致，12h达最大值，54．43±0．63，与空白对照比较存在明 点表达量与损伤组无明显差异(PO．05)。MP组大鼠伤后也 有明显的NF—K 12 组及损伤组(P0．05)，h达最高值42．95±1．01，但表 达量明显低于损伤组及EPO组，差异明显，其中以8h、：12h 两时间点尤为显著(PO．01)，伤后5