大蒜素单独及与顺铂联用对人子宫内膜癌lshikawa细胞的影响.pdfVIP

中文摘要 大蒜素单独及与顺铂联用对人子宫内膜癌 I sh i kawa细胞的影响 摘 要 々 目的：子宫内膜癌是女性生殖器官常见的恶性肿瘤之 。 一。近年子宫内膜癌的发病率有逐渐增高的趋势。对于那些 不能手术或术后复发的患者，可给与化疗。然而在肿瘤化疗 过程中，抗癌药物在杀伤肿瘤细胞的同时，对正常增殖细胞 也有杀伤作用，因而影响化疗的疗效。而且化疗药物都有较 严重的副反应，因而患者治疗的依从性差，生活质量明显降 低。所以如何使药物对肿瘤细胞最大限度的杀伤，而对正常 细胞的毒性减少到最低的化疗方案成为人们关注的焦点之 一。本研究旨在通过细胞培育探讨大蒜素单独及与顺铂连用 对子宫内膜癌ishikawa细胞生长的影响，从而为临床减少 化疗药物的剂量，减轻化疗的副反应提供充分的实验室依 据。 方法：1．细胞培育：常规复苏冻存的ishikawa细胞接 种于100m1培养瓶中，加入青、链霉素，使青霉素浓度为 1 100工U／ml，链霉素浓度为100ug／m1，37℃、5％C0：饱和湿度 。¨。 培养箱内松盖培育。以0．25％胰蛋白酶消化传代。 ， 2．细胞增殖实验：取对数生长的ishikawa细胞，制成 浓度为7×俐个／m__¨狗细胞悬液，接种到96孔培养板中，每 孔100u1，5小时贴壁后，4℃培养1小时，以促进细胞同步 化生长。换培养液，实验组分为大蒜素组、顺铂组和大蒜素 中文摘要 的培养液；顺铂组加入含顺铂为1．0、2．5和5．0mg／L的培 养液，大蒜素+顺铂组加入含各浓度大蒜素和1．0mg／L顺铂 的培养液，对照组为含0．01％吐温80的培养液。每一浓度均 设6个平行孔。每个实验均重复3次。继续培养24、48和 培养箱继续孵育4小时。吸净上清液，每孔加入二甲基亚砜 时测定每孔的吸光度(A)值，并计算抑制率(抑制率=对照组A 值一实验组A值／对照组A值)。每个实验均重复3次。 3．细胞周期和细胞凋亡的检测：将浓度为7×104个／ml 接种于100m1培养瓶中。贴壁，同步化处理后加入各浓度实 验组培养液。对照组加入含0．01％吐温80的培养液。继续培 养72小时，用胰酶消化后收集细胞，用70％的冷乙醇固定， cytometer，FCM)分析。 4．细胞的形态学观察：(1)将浓度为7×104个／ml的 对数生长期，换培养液，大蒜素组加入大蒜素浓度分别为 r 大蒜素和1．0mg／L顺铂的培养液。对照组加入含0．01％吐温 ’A 80的培养液。继续培养72h，倒置显微镜下观察并摄影。(2)6 ＼- 孔培养板每孔预先放置一盖玻片，然后接种浓度为7×101 生长期，换培养液，对照组、实验组处理同上。继续培养72h， 取出盖玻片，姬姆萨染色10—15分钟，I刍来水冲洗，晾干， 二甲苯透明，中性树胶封片，光学显微镜下观察。(3)将相 中文摘要 方法培育72h，胰酶消化后收集细胞，4％戊二醛固定、脱水、 浸透、包埋、切片、染色、采用JEM—1230型透射电镜观察。 shi 5．I 取物，反应总体积为50ul。PCR仪行产物扩增；引物延长， 一个循环；端粒酶灭活，一个循环；端粒酶扩增30个循环； 72℃平衡10min，4。C保存。(