四株具漆酶活性的细菌的筛选、鉴定及酶学性质初步研究.pdfVIP

致谢 三年研究生生活匆匆而过，研一刚进实验室的那种兴奋宛如昨日，如今却要 离开和我一起学习、生活的老师、同学们，说真的，心情很复杂，其中的不舍自 是难于言表。 本文是在导师王行国教授悉心指导下完成的。王行国先生慈祥而富学，引导 着我在科学的殿堂里修心、积慧、学道；先生严谨的治学态度使我能够在科学研 究的每一个环节克勤克俭，一丝不苟；先生自由的学术思想，使我们有了畅快淋 漓的辩论和交流，辩中求真、辩中明理。 本文不仅凝结着先生的殷殷教诲，还饱含着先生教我做科学和做人的哲理， 三年庇荫，受用终生。在研究的每一个环节，导师都倾注了大量的心血，在论文 完成之际，对导师三年来的精心指导和谆谆教诲表示最真挚的感谢。 先生麾下有一个令人难舍的集体，那就是我的兄弟姐妹们。师妹们灿如花朵， 师弟们青春荡漾，使我在繁重的论文工作中还体验着愉悦和轻松。我们学术的辩 论，生活的关照，加深着我们一脉相承的友谊与亲情。尤其是宣文静，感谢她在 论文的完成过程中给予了极大的帮助。 此外，我还要感谢陈永勤、马立新老师的热心指导和帮助。感谢院办公室、资 料室的全体老师给予的大量帮助。 三年来，我的亲人和朋友一直给了我极大的鼓励、帮助和支持，没有他们理 解、支持和帮助，论文工作不可能得以顺利完成。这里我应特别提到爱妻詹晓梅， 衷心地感谢她三年来持家抚幼和体贴支持! 论文摘要 根据抗铜特性和使用活性染色方法，从武汉武昌黄金桥山和江汉油田附近 多年生树木根部土壤中筛选到四株具漆酶活力的细菌。凝胶活性染色表明它们 都能够氧化漆酶底物DMP和ABTS，但不能氧化酪氨酸。 利用16S rDNA序列分析法，结合常规细菌形态学分析，对四株细菌进行鉴 胞菌属(P船“咖mD删)，而菌株60l属于克雷伯氏菌属(jm缸fP妇)，并分别将 这阻株纽菌命笔为ochrobnctrt sp．53j、ochrobdctrumsp．575、Pseu面monns sp．593帮融ebstellnsp．60l。 Dc办，D6口c护蜊印．J、0Ic矗rD6口c伊蜊印．5乃和n口“而掰D甩甜踞j妇三个菌株 的漆酶活性需要铜离子的诱导，其铜离子的诱导作用不能被Ca2+、Mn2+、zn2+、 Fe”、和M矿+代替。jm如把肠够6D』菌株的漆酶活性需要铜离子的诱导，相同 用。在使用LB培养基培养细菌时，诱导细菌产生漆酶需要在培养基中加入大于 50“Mcus04。当培养基中铜离子浓度超过400肛M时，细菌生长变慢，显示高浓 度铜离子对细菌生长有抑制作用。 活性染色时染色液的pH对四株细菌漆酶的活性有明显的影响。胶内活性染 和Jm撕fP砌印．6D』在pH5．O到pH7．5之间显示酶活性。当染色液pH低于5．O 时，不显示DMP．氧化活性。用ABTS作底物时，0如加6口c护“m阳．J、 4．0-4．5之间显示漆酶活。当染 Dc^，D6口c护“研印．5乃和』m65fP肋够卵3仅在pH 色液pH大于4．5则不显示酶活性。与上述三株细菌酶活不同，无论是用DMP 还是ABTS作底物，n口“如mDn甜驴5粥在pH5．0到7．0范围内，都显示酶的氧 6．O处显示最强的酶活力。无论是DMP还是ABTS用作底物， 化活性，并在pH 对照用的蘑菇粗提液只在pH4．O左右显示漆酶活力。当pH大于4．5时则不显示 酶活性。 分别用4一loo℃的不同温度处理四株细菌粗提物30分钟，然后在pH5．O条 件下进行DMP胶内活性染色。结果显示：(1)四株细菌在均能耐受60℃高温处理。 2 。cA，D6口c肛“珊印．5乃仍保持50％以上酶活力，而们^加6口c驴“埘印．575和 5．0条件下进行胶内DMP一氧 在pH3—10的不同条件下透析20小时，然后在pH 化活性染色。在pH 印．5硝细菌漆酶仍保持80％酶活；pH6．O．10．O条件下处理，nP“力mD聆甜够5粥 细菌漆酶的相对活性在80％以上：pH5．O．10．0条件下处理，厨P曲fe№够6D』细